帕金森病患者脑脊液中疾病特异性蛋白生物标志物的初步筛选

论文摘要

目的绘制帕金森病（Parkinson’s disease, PD）患者,以及特发性震颤患者（essential tremor,ET）、多系统萎缩患者（Multiple system atrophy,MSA）、头痛对照组脑脊液蛋白质表达谱,并分别进行比较,寻找差异蛋白质点;确定PD的疾病特异性蛋白（disease-specific proteins,DSPs）,探寻PD的生物标志物。方法采用双向凝胶电泳（2-DE）技术,以固相pH梯度等电聚焦（IPG-IEF）为第一向,垂直平板十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）为第二向分离蛋白质;用银染法对电泳后凝胶染色;凝胶图像扫描并用Pdquest软件进行图像分析,寻找有意义的差异蛋白点;利用MALDI-TOF-MS技术对差异蛋白点进行鉴定,分析其意义;采用ELLISA对其中差异显著蛋白进行定性和定量,验证质谱结果。结果①获得PD患者,以及ET患者、头痛患者、MSA患者各组脑脊液的2D-PAGE图谱;②通过比较确定了六个有意义的差异蛋白点,经鉴定分别为泛素连接酶（fubiquitin protein ligase,E3）,载脂蛋白E （Apolipoprotein E,Apo-E）,NADH-泛醌氧化还原酶ASHI亚单位（NADH-ubiquinone oxidoreductase ASHI subunit）,胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）,蛋白（质）酪氨酸磷酸酶1B （Protein-tyrosine phosphatase 1B,PTP-1B）,载脂蛋白A I（Apolipoprotein A-I precursor,Apo-A1）。其中E3、ApoE、NADH-泛醌氧化还原酶ASHI亚单位在PD、MSA患者组相对于ET、头痛组下调,而后三个蛋白质点在PD组相对于MSA、ET和头痛组上调。③采用ELISA法对Apo-E进行了验证,结果与蛋白质组学结果一致。结论PD患者组脑脊液2D-PAGE图谱与头痛、ET、MSA患者对照组脑脊液2D-PAGE图谱之间存在差异;共鉴定出六个差异蛋白,这些蛋白主要涉及氧化应激、神经营养和修复、蛋白降解等,与PD关系密切,有可能是帕金森病的DSPs,并有可能成为PD诊断的分子标志物;用ELISA法对PD、头痛组、ET及MSA脑脊液中Apo-E进行定性和半定量,结果与蛋白质组学结果一致,表明蛋白质组学方法可行、结果可信。

论文目录

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• 论文正文：帕金森病患者脑脊液中疾病特异性蛋白生物标志物的初步筛选
• 前言
• 1 资料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文目录