PPARα激动剂OEA的合成以及其与动脉粥样硬化关系的研究

论文摘要

动脉粥样硬化是21世纪威胁人类健康的头号杀手,在西方发达国家,其死亡率占总死亡率的50%以上。据美国心脏协会统计,心血管疾病侵害了近六千万美国人。在我国,随着生活水平提高和人口老龄化,心脑血管疾病发病率呈逐年上升趋势,并且患病年龄趋于年轻化,有关动脉粥样硬化药物的研究也成为药物研究的热点。临床上使用最为广泛的他汀类药物治疗动脉粥样硬化疗效确切,但在升高高密度脂蛋白胆固醇和降低甘油三酯以及改善胰岛素耐受性方面作用较小,PPAR激动剂在弥补这一不足方面已显示出较强的优势。由于PPAR激动剂在降低血脂和改善血管内皮功能以及增加胰岛素敏感性等方面表现出的优势,目前已经成为动脉粥样硬化和代谢综合症药物的主要研究方向。本论文的目的在于论证油酰乙醇胺对于PPARs的激动作用,以及其对于动脉粥样硬化的主要炎症标志物的影响,阐明PPARs在动脉粥样硬化中的作用。本论文主要采用转录激活实验检测油酰乙醇胺对PPARα,PPARβ,PPARγ的激活作用;采用体外培养技术分离培养人脐静脉内皮细胞,使用荧光定量PCR技术和蛋白免疫印迹技术检测油酰乙醇胺对脐静脉内皮细胞PPARαmRNA和蛋白表达的影响;并采用荧光定量PCR技术技术和酶联免疫吸附实验技术检测油酰乙醇胺对脐静脉内皮细胞粘附分子（血管细胞粘附分子1和细胞间粘附分子1）mRNA和蛋白表达的影响。本论文从油酸出发通过简单的方法合成油酰乙醇胺,并证明油酰乙醇胺在细胞内能与PPARα和PPARβ结合,对PPARα和PPARβ具有激活能力,而且对PPARα的激活能力远远大于对PPARβ,因此,油酰乙醇胺对PPARα具有较高的亲和力,是有效的PPARα激动剂。同时,油酰乙醇胺能够显著地抑制由于TNF-α诱导引起的人脐静脉内皮细胞粘附分子的表达,且抑制作用大于临床上常用的PPARα激动剂非诺贝特。推测其机理可能为激活的PPARα与NF-κB的亚基P65结合,导致NF-κB不能与粘附分子的启动子部位κB位点发生特异性结合,从而抑制粘附分子的转录;另一方面,激活的PPARβ会释放出共同抑制因子BCL-6,而BCL-6会抑制NF-κB的亚基P50及其前体P105的表达,从而进一步抑制粘附分子的表达。通过本论文的研究得到以下结论:PPAR的激活可以抑制动脉粥样硬化过程中炎症标志物的表达,油酰乙醇胺通过PPAR通路抑制TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞粘附分子的表达,对于预防和治疗动脉粥样硬化有一定的作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1 过氧化物酶体增殖物激活受体α
• 1.1 PPARs的结构和功能
• 1.2 PPARα的生物活性
• 1.3 PPARα的配体
• 2 PPARα在动脉粥样硬化中的作用
• 2.1 动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）的发病机理
• 2.2 PPARα与动脉粥样硬化危险因素之间的关系
• 3 油酰乙醇胺（OEA）的概述
• 3.1 OEA的生物合成
• 3.2 OEA的水解
• 3.3 OEA的生理活性
• 4 本论文的主要内容和研究意义
• 参考文献
• 第二章 OEA的合成和人脐静脉内皮细胞的培养与鉴定
• 1 OEA的合成
• 1.1 OEA合成方法分析
• 1.2 合成步骤
• 1.3 合成结果与讨论
• 2 脐静脉内皮细胞原代培养与鉴定
• 2.1 仪器与试剂
• 2.2 主要试剂的配制
• 2.3 实验方法
• 2.4 实验结果与讨论
• 3 本章小结
• 参考文献
• 第三章 OEA对人脐静脉内皮细胞PPARα表达的影响
• 1 实验仪器和试剂
• 2 主要试剂的配制
• 3 实验方法
• 3.1 转录激活检测
• 3.2 RT-PCR和荧光定量PCR
• 3.3 蛋白免疫印迹（Western Blotting）
• 3.4 统计学处理
• 4 结果与讨论
• 4.1 OEA对PPARs的激活作用
• 4.2 OEA对PPARα mRNA表达的影响
• 4.3 OEA对PPARα蛋白表达的影响
• 5 本章小结
• 参考文献
• 第四章 OEA对人脐静脉内皮细胞VCAM-1和ICAM-1表达的影响
• 1 实验仪器和试剂
• 2 主要试剂的配制
• 3 实验方法
• 3.1 RT-PCR和荧光定量PCR
• 3.2 酶联免疫吸附实验
• 3.3 免疫细胞化学染色
• 3.4 统计学处理
• 4 结果与讨论
• 4.1 OEA对VCAM-1和ICAM-1 mRNA表达的影响
• 4.2 OEA对VCAM-1和ICAM-1蛋白表达的影响
• 5 本章小结
• 参考文献
• 第五章 结论与展望
• 缩略语表
• 致谢