滨海湿地药用植物盐地碱蓬HPLC化学指纹图谱与网状软柳珊瑚化学成分及其生物活性研究

论文摘要

盐地碱蓬（ Suaeda salsa ）属藜科一年生草本植物,一般生于海滨、荒漠低处的盐碱荒地上,是典型的盐碱地指示植物。有报道盐地碱蓬提取物的甲酯化产物对急性炎症有明显的抑制作用,其幼苗的分离提取物也具有增强非特异性免疫功能作用。碱蓬属植物种子油富含人体生长发育所必需的脂肪酸,特别是不饱和脂肪酸含量高,具有降糖、降压、扩张血管、防治心脏病和增强人体免疫力等药理作用,适用于预防心血管系统疾病,是老年人、高血压病人以及健康人群良好的保健食用油。碱蓬在我国主要生长于新疆、蒙、甘、陕、鲁、晋、辽等省区。我国共有碱蓬属植物20种及1个变种,常见种为灰绿碱蓬（Suaeda glanca bunge）和盐地碱蓬（S. salsa L. Pall） ,其中灰绿碱蓬的产量最高。盐地碱蓬是江苏沿海一线从苏鲁交界的绣针河口到长江口1 000多公里的平原海岸淤滩上的优势物种。当前对碱蓬属植物的研究主要集中在灰绿碱蓬、盐地碱蓬及翅碱蓬。本文以采集于东营不同经纬度的12批盐地碱蓬样品为研究对象,运用HPLC技术,通过色谱条件和提取工艺的优化,建立了盐地碱蓬的HPLC参考指纹图谱,指纹图谱中包含16个共有峰。指纹图谱方法学及系统适应性试验结果符合指纹图谱研究的技术规范。同时,对所建立的盐地碱蓬参考指纹图谱进行了应用研究,结果证实,所建立的盐地碱蓬参考指纹图谱可用于盐地碱蓬药材的真伪鉴别。柳珊瑚俗称海扇或海鞭,在分类学上,属腔肠动物门,珊瑚纲,八放珊瑚亚纲。一般生长在热带、亚热带从潮间带到深达4000米的海洋中。我国有7科45种,主要分布于海南、广东、浙江和台湾沿海。软柳珊瑚属（Subergorgia）动物广泛分布在印度-太平洋的热带和亚热带海域,至今,本属动物在我国南海发现有4种:网状软柳珊瑚（S. reticulata）、红枝软柳珊瑚（S.kollikeri）、粉灰软柳珊瑚（S.ornata）和侧扁软柳珊瑚（S.suberosa）。近半个世纪的研究表明,柳珊瑚富含结构新颖和生物活性多样的化学成分。文献检索证实,网状软柳珊瑚Subergorgia reticulata中含有抗肿瘤活性成分,本文对2007年8月2号采自中国南海三亚海域的网状软柳珊瑚Subergorgia reticulata进行了系统的化学成分和生物活性研究。化学成分的分离纯化与结构鉴定:以硅胶柱色谱、薄层色谱、凝胶柱色谱和半制备高效液相色谱等高效分离方法对网状软柳珊瑚Subergorgia reticulata的甲醇提取物进行活性追踪分离,从中共得到38个化合物。用核磁共振谱、红外光谱、质谱等波谱学方法并结合理化性质确定了31个化合物的结构,其中包括3个新天然产物（13）。在结构类型上,包括23个甾醇类化合物:新天然产物1（1）,新天然产物2（2）,新天然产物3（3）,（3S, 16S, 20R, 22R, 24S）- 6, 24 : 20, 24 - Diepoxycholest - 5 - ene - 3, 22, 25 - trial 3, 22 - Diacetate（4）,（3S, 16S, 20R, 22R, 24S） - 16, 24 : 20, 24 - Diepoxycholest - 5 - ene - 3, 22, 25 - triol 3 - Acetate（5）, （3S, 16S, 20R, 22R, 24S） - 16, 24 : 20, 24 - diepoxycholest - 5 - ene - 3, 22, 25 - triol 3 - Acetat（e6）,3, 22, 25 - trihydroxy - 16, 24 : 20, 24 - bisepoxy - 3β, 16β, 20S, 22R, 24S - cholest - 5 - ene（7）, （3β, 5α, 6β） - 6 - methoxyergosta - 7 - ene - 3, 5 - diol（8）, （22E, 24R） - 24 - Methylcholesta - 5, 22 - diene - 3β, 7β- diol（9） ,（3β, 5α, 6β） - 6 - methoxycholest - 7 - ene - 3, 5 - diol （10）,（3β, 5α, 6β, 22E） - 6 - methoxycholest - 7, 22 - diene - 3, 5 - diol（11）, （3β, 5α, 6β, 22E） - 6 - methoxyergosta - 7, 22 - diene - 3, 5 - dio（l12）,（22E, 24R） - 24 - Methylcholesta - 5, 22 - diene - 3β, 7α- diol（13）,（22E） - dehydrocholesterol（14）,24 -亚甲基胆甾醇（15）,24α- methylcholesta - 5, 22 - dienol（16）,cholesterol（17）,isofucosterol（18）,（22E, 24S） - 24 - Methyl - 5α- cholesta - 7, 22 - diene - 3β, 5α, 6β– triol（19）;5α- cholest - 7 - ene - 3β, 5, 6β- triol（20）,（22E） - 5α- cholesta - 7, 22 - diene - 3β, 5, 6β- trio（l21）,（22E, 24R） - 24 - ethyl - 5α- cholesta - 7, 22 - diene - 3β, 5α, 6β- trio（l22）,（24S） - 24 - Methyl - 5α- cholest - 7 - ene - 3β, 5α, 6β- trio（l23）;2个嘧啶类化合物:尿嘧啶（24）,胸腺嘧啶（25）;3个核苷类化合物:尿嘧啶- 2’-脱氧核苷（26）,胸腺嘧啶核苷（27）,胸腺嘧啶- 2’-脱氧核苷（28）;1个咖啡碱类化合物:咖啡因（caffeine）（29）;1个神经酰胺类化合物:（E） - N - 2（1, 3 -二羟基- 4 -十八烯基） -十六酰胺（30）和1个苯甲酰基衍生物:邻苯二甲酸正二丁酯（31）。生物活性研究:选择P388（小鼠白血病细胞）、HeLa（人宫颈癌细胞）和K562（人白血病细胞株）三种肿瘤细胞株,用MTT法和酶联免疫吸附测定（ELISA）法对大部分单体化合物的体外抗肿瘤活性进行了初步评价。结果表明,化合物4、化合物6和化合物12在浓度为100μg/ml时对P388和HeLa两株肿瘤细胞显示一定程度的抗肿瘤活性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一部分 滨海湿地药用植物盐地碱蓬 HPLC 化学指纹图谱研究
• 前言
• 第一章 盐地碱蓬属植物的利用价值及HPLC指纹图谱技术研究进展
• 1.1 盐地碱蓬属植物的利用价值研究
• 1.2 中药指纹图谱技术
• 1.3 立题目的与意义
• 参考文献
• 第二章 盐地碱蓬HPLC化学指纹图谱研究
• 2.1 仪器试剂及药材
• 2.2 色谱条件的建立
• 2.3 提取工艺考察
• 2.4 指纹图谱方法验证
• 2.5 指纹图谱的确立与应用
• 2.6 小结与讨论
• 参考文献
• 结语与展望
• 缩略语注释
• 第二部分 网状软柳珊瑚化学成分及其生物活性研究
• 前言
• 第一章 Subergorgia 属的研究综述
• 1.1 Subergorgia 属化学成分的研究
• 1.2 Subergorgia 属生物活性的研究
• 参考文献
• 第二章 网状软柳珊瑚Subergorgia reticulata 化学成分研究
• 2.1 网状软柳珊瑚的研究概述
• 2.2 论文中分离得到的化合物
• 2.3 部分化合物的结构解析
• 2.4 实验部分
• 参考文献
• 第三章 网状软柳珊瑚Subergorgia reticulata 生物活性研究
• 3.1 生物活性实验
• 3.2 小结与讨论
• 参考文献
• 结语与展望
• 缩略语注释
• 致谢
• 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果
• 化合物名称对照表
• 附图