NF-κBp65对HepG2细胞hTERT的调节作用的研究

论文摘要

研究背景：炎症反应与癌症具有密切的联系。持久炎症反应的组织往往会发展成为癌组织,而联系炎症反应与癌的重要中间分子是NF-κB,在炎症及肿瘤细胞中高表达,能调节炎症和肿瘤相关的多种基因的表达。临床研究发现,大多数肝癌患者既往有肝炎和肝硬化病史,大多数肝癌的发生规律归纳如下：HBV,HCV,酒精,其他-慢性肝炎-肝纤维化-肝硬化-肝癌。同时发现,肝脏中hTERT的表达量在正常肝组织—肝纤维化—肝硬化—肝癌的进程中逐渐升高。近年来有NF-κB与hTERT的相关性研究的报道：在胃癌早期NF-KBp65mRNA与hTERT基因mRNA表达都上调,且具有正相关性。在人类T淋巴细胞白血病病毒感染的T细胞株中,NF-KB P65对hTERT在转录水平进行调控。后来进一步发现NF-KB P65能与hTERT瞬间结合,共同移位到细胞核中,使核内hTERT蛋白表达上调,从而实现NF-KB P65在核移位上对hTERT进行调控。但在慢性肝病-肝癌发生中还没有关于NF-κB与hTERT的相关性及NF-κB能否在转录水平及翻译水平对hTERT进行调控研究的报道。目的：探讨在HepG2肝癌细胞株中,NF-KBp65对hTERT在转录水平与翻译水平的调节作用；同时观察地塞米松对LPS诱导HepG2肝癌细胞株中NF-KBp65和hTERT的作用。方法：MTT法检测MG-132及地塞米松对肝癌细胞的增殖作用；RT-PCR检测NF-κBp65和hTERT mRNA表达水平；Western blot检测hTERT的蛋白表达,细胞免疫荧光法检测NF-κBp65的活性。结果：1.MG-132可呈剂量依赖性（1.0 to5.0μM）及时间依赖性（12h,24h,36h）的抑制NF-κBp65mRNA表达,显著降低NF-κB活性。NF-κB活性被阻断后,hTERT mRNA及蛋白表达明显抑制。2.LPS可呈剂量依赖性（0.5 to 2.5μM）增强NF-κBp65 mRNA表达,伴有NF-κB活性的显著增强。同时LPS可增强hTERT mRNA及蛋白表达。3.地塞米松能显著抑制NF-KBp65mRNA表达及活性,同时伴有hTERT mRNA及蛋白表达降低。结论：1.在HepG2肝癌细胞株中,NF-KBp65既能调控hTERT的mRNA水平,又能调控hTERT的蛋白表达。2.MG-132与地塞米松抑制细胞增殖,可能通过抑制NF-KBp65调控hTERT表达,进而下调端粒酶活性有关。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 符号说明
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 细胞系
• 2.1.2 主要试剂及试剂盒
• 2.1.3 主要仪器
• 2.1.4 常用溶液的配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 试验路线
• 2细胞的培养'>2.2.2 HepG₂细胞的培养
• 2.2.3 实验分组
• 2.2.4 MTT法检测MG-132及Dex对细胞生存能力的影响
• 2.2.5 RT-PCR试验
• 2.2.6 细胞免疫荧光
• 2.2.7 Western blot试验
• 2.2.8 统计分析
• 第三章 结果
• 2细胞增殖的影响'>3.1 MG-132和Dex对HepG₂细胞增殖的影响
• 3.2 MG-132、LPS对NF-κBp65mRNA表达的影响及Dex的作用
• 3.3 MG-132、LPS对hTERTmRNA表达的影响及Dex的作用
• 3.4 免疫荧光检测NF-κB的活性
• 3.5 Western blot检测hTERT蛋白的表达
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 附录
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果