论文摘要
猪流感（Swine influenza,SI）是由猪流感病毒（swine influenza virus,SIV）感染猪群引起的一种猪的急性、传染性呼吸道疾病。SIV属正黏病毒科（Orthomyxoviridae）甲型流感病毒属（Influenzavirus A）及丙型流感病毒属（Influenzavirus C）,目前在全世界猪群中流行的主要是甲型猪流感病毒。猪流感每年都对养猪业造成巨大的损失,同时作为重要的人畜共患病,其公共卫生学意义也十分重要。1.采集临床上出现呼吸道疾病症状的病死猪肺脏样品,接种SPF鸡胚,分离到1株病毒,命名为A／swine／Shanghai／1／2007（Sw／SH／1／2007）经鉴定Sw／SH／1／2007为H1N2亚型猪流感病毒。为进一步揭示该病毒遗传起源和分子特性,对病毒的8个基因片段进行了序列测定和遗传发生分析。结果显示,Sw／SH／1／2007的8个基因片段与2005-2006年分离自海南和广西的三株猪流感病毒相似性较高,遗传进化上同为北美三源重组H1N2亚型猪流感病毒,除M基因和NA基因外,其它的6个基因与最近爆发的猪源甲型H1N1人流感病毒有较高的同源性。与1999年分离自Indiana的北美三源重组H1N2亚型猪流感病毒标准毒株A／swine／Indiana／9K035／99相比,Sw／SH／1／2007的HAl蛋白有25个氨基酸的变异,其中有7个氨基酸发生在抗原位点,1个氨基酸的变异发生在受体结合位点上。由于276Asn→Ser的替换,Sw／SH／1／2007在276位丢失了一个潜在的糖基化位点；但同时由于274Asp→Asn的突变,在274位又出现了1个新的糖基化位点。我国2006年首次报道分离到3株北美三源重组型H1N2猪流感病毒,本次分离到的H1N2亚型猪流感病毒与这三株重组病毒亲缘关系较近,但与祁贤2004年报道的在浙江省分离的国内重组型H1N2亚型流感病毒具有较大的差异。这说明我国猪群中存在的H1N2亚型猪流感病毒来源较为复杂,既有人流感病毒和古典H1N1亚型猪流感病毒自然重配而产生的,同时也存在来源于北美的三源重组型H1N2猪流感病毒。2.从发生呼吸道疾病的某猪场中分离到一株病毒,经鉴定为H1N1亚型流感病毒。命名为A／Swine／Zhejiang／1／2007,简称Sw／ZJ／1／2007,对其8个基因片段进行全序列测定和遗传发生分析,核苷酸同源性分析结果表明,Sw／ZJ／1／2007的8个基因片段与禽源H1N1 SIV的相应基因同源性最高,其PB2.PB1.PA.HA. NP.NA.M和NS的核苷酸相似性为分别为96%、97%、97%、95%、97%、96%、98%和98%,表明Sw／ZJ／1／2007属于禽源H1N1 SIV,病毒没有基因重配现象发生。与6株禽源H1N1亚型猪流感病毒的氨基酸相似性为91.3-96.5%；与禽流感病毒Duck／Bavar ia／1／77相似性为88.3%。Sw／ZJ／1／2007的HA1蛋白序列与A／swine／Cotes d’Armor／1488／99相似性最高（96.5%）,有14个氨基酸的差异,其中2个位于抗原位点Ca上。6个受体结合位点相对保守,只有134和222位存在变异。为了进一步揭示其遗传发生起源,绘制了Sw／ZJ／1／20078个基因片段的遗传进化树,结果表明Sw／ZJ／1／2007分离株与流行于欧洲的禽源H1N1 SIV属于同一亚系。此前中国大陆还未有该类猪流感病毒的报道,这提示我们近年来中国大陆地区猪流感的流行情况较为复杂。3. A／swine／Shanghai／1／2007（Sw／SH／1／2007）病毒1.84×104TCID50通过呼吸道途径人工感染60日龄仔猪,感染后间隔不同时间采取呼吸道粘膜样品、肛门拭子及内脏器官,采用荧光定量RT-PCR的方法检测病毒在仔猪体内的分布情况。结果,仔猪感染Sw／SH／1／2007后仅产生轻微的流感症状,并在两周后痊愈,整个流感病程约为2周,排毒持续时间1周。呼吸道粘膜、喉、气管在第3天即可检测到病毒,并持续到第10天；肺部淋巴结、脾脏在第5-7天检测到病毒；另外,除第5天采集的一头仔猪脑组织样品检测到病毒外,其它脏器均未检测到病毒,表明病毒的主要定殖组织为呼吸道系统以及脾脏。肛门拭子在感染后2-8天可持续检测到病毒核酸；鼻腔拭子在感染后即可检测到病毒,并在局部粘膜持续存在8天左右。结论：呼吸道粘膜是猪流感病毒的主要定殖场所,猪感染病毒以后,很快就可通过粪便向环境中排毒。
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