酿酒酵母HAL5的功能研究

论文摘要

细胞的一个重要特性是调节胞内的离子平衡,维持离子代谢的稳态。对于酿酒酵母的研究已在分子水平上发现了许多离子通道,但是到目前为止,调节离子进出和维持细胞内离子浓度的信号传导途径还有待于进一步深入的研究。酿酒酵母蛋白激酶Hal5和蛋白磷酸酯酶Ptc1都参与调控细胞对Li+耐受,但是并没有研究发现在这一调控过程中两者之间存在联系。在本论文中,我们首先构建了表达Hal5-HA融合蛋白的单拷贝质粒pHAC111-HAL5以及多拷贝质粒pHAC181-HAL5,从而为进一步研究HAL5的功能奠定了基础。其次,通过传统的遗传学表型鉴定和Western Blot检测蛋白方法,研究了酿酒酵母的HAL5基因和PTC1、PTC7基因在调节细胞对Li+的耐受性方面的相互作用关系。实验发现在酿酒酵母中过量表达HAL5能够压制因ptc1单缺失和ptc1ptc7双缺失所引起的细胞对于Li+的敏感性,证明了HAL5和PTC1之间存在遗传互作。进而我们又在蛋白水平上研究了两者之间的关系,结果显示ptc1缺失会引起HAL5的表达量上升,说明PTC1基因对HAL5在蛋白水平上存在负调控。最后,我们还研究了HAL5与受PTC1调控的HAL3、PPZ1,2的相互关系。证明了HAL5与PPZ2,HAL3之间都存在遗传互作。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 酿酒酵母简介
• 1.1.1 酵母及酿酒酵母
• 1.1.2 酿酒酵母基因组组成
• 1.1.3 酿酒酵母作为模式生物
• 1.2 酿酒酵母HAL5 及PTC1 对Li + 调控的研究进展
• 1.2.1 酿酒酵母离子平衡概述
• +调控'>1.2.2 酿酒酵母Hal5 通过Trk1-Trk2 实现对的Li⁺调控
• +的调控'>1.2.3 酿酒酵母Ptc1 通过Hal3－Ppz途径实现对Li⁺的调控
• 1.3 本论文研究的内容和意义
• 第二章 实验材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 菌种及质粒
• 2.1.2 主要实验仪器
• 2.1.3 工具酶与试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 常用溶液与缓冲液的配制
• 2.2.2 实验方法
• 第三章 酿酒酵母HAL5 的基因克隆
• 3.1 单拷贝质粒pHAC111-HAL5 的构建
• 3.1.1 克隆策略
• 3.1.2 实验结果
• 3.1.3 结论
• 3.2 多拷贝质粒pHAC181－HAL5 的构建
• 3.2.1 克隆策略
• 3.2.2 实验结果
• 3.2.3 结论
• 3.3 本章结论
• 第四章 酿酒酵母HAL5 的功能研究
• +敏感性的影响'>4.1 在酿酒酵母ptc1△和ptc1△ptc7△中表达HAL5对细胞Li⁺敏感性的影响
• 4.1.1 实验结果
• 4.1.2 结论
• 4.2 HAL5 与HAL3，PPZ1，PPZ2 遗传上的相互作用关系
• 4.2.1 实验结果
• 4.2.2 结论
• 4.3 PTC1 和PTC7 对酿酒酵母HAL5表达的影响
• 4.3.1 实验结果
• 4.3.2 结论
• 4.4 本章结论
• 第五章 总结
• 参考文献
• 发表论文和科研情况说明
• 致谢