论文摘要
食管癌是胃肠道肿瘤中死亡率最高的癌种之一,其发生也是一个渐进的过程,通常由上皮单纯性增生再发展为不典型增生,然后发展为原位癌、侵袭癌。肿瘤动物模型是为了基础与临床肿瘤研究而建立的具有人类肿瘤模拟表现的动物材料,其中以诱发性肿瘤动物模型最为常见,现阶段常以化学致癌剂诱发动物食管癌。甲基苄基亚硝胺（NMBzA）是从食管癌高发地河南林县人胃液与膳食中分离与鉴定出来的亚硝胺类化合物,能特异地诱发动物食管癌。在本课题中,我们利用NMBzA口服灌喂Wistar雄性大白鼠成功诱导食管癌。收集大鼠食管得到从正常-炎症-轻度不典型增生-中度不典型增生-重度不典型增生-原位癌-鳞癌的动态病理变化过程。选择有代表性的时间点,检测重要食管癌相关基因的突变和DNA拷贝数改变,发现从炎症阶段起即有基因发生突变和DNA拷贝数扩增。同时,在食管癌动态样本中利用mRNA表达谱芯片得到差异表达基因谱,对差异表达基因进行深入的生物信息学分析,发现它们主要参与细胞外基质-受体反应和黏着斑信号通路。MiRNA芯片发现病理样本中miR-615-5p高表达,miR-615-5p可能通过调控其靶基因TGFβ1促进细胞体外增殖、抑制UV诱导的凋亡。同时利用食管组织标本在蛋白水平验证食管癌相关基因的表达改变,分析基因组突变、扩增、芯片结果和蛋白表达的相关性,通过对基因功能的解读,深层次地全面系统地揭示食管癌的发病机理。综上所述,本文提供从DNA、RNA到蛋白水平完整的动物平台,研究食管从正常到癌变的动态过程中分子水平的动态改变,将为食管癌发生发展的机制研究提供更多研究思路和理论支持。Aurora-A是一个在有丝分裂进程中发挥着重要作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。Aurora-A的失调影响中心体分离和成熟,进而导致细胞周期紊乱和肿瘤形成。然而,Aurora-A导致细胞恶性转化的分子机制尚不清楚。本研究利用转录因子芯片和mRNA表达谱芯片发现Aurora-A高表达后抑制AP-2a的转录活性,并下调AP-2a作用的靶基因,同时转录因子微孔比色实验和双荧光素酶报告基因实验证实了芯片结果。我们也发现Aurora-A抑制AP-2α的转录活性与降低其蛋白稳定性有关,并通过介导AP-2α泛素-蛋白酶体降解途径完成,这个过程依赖Aurora-A的激酶活性。最后,我们证实Aurora-A和AP-2a存在相互作用,从而导致Aurora-A对AP-2α蛋白稳定性的调控。本研究在以往基础上进一步阐明Aurora-A作为一个癌基因参与肿瘤发生发展的分子机制。