论文摘要
研究目的:研究缺氧缺血性脑病新生儿血清中神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达及其在判断病情及预后的价值;研究血管内皮生长因子（VEGF）、色素上皮衍生因子（PEDF）在缺氧缺血性脑病新生儿血中的动态变化,以推测它们在脑损伤转归中的意义。方法:1.将60例缺氧缺血性脑病新生儿依据临床症状分为轻度HIE组、中度HIE组及重度HIE组,各组分别为20例,另分别选择无窒息史及其它神经系统疾病的新生儿20例作对照组。均于生后24h内、第3天、第7天抽血,用酶联免疫双抗夹心法测定血清中神经元特异性烯醇化酶（NSE）。2.将所有检测过神经元特异性烯醇化酶（NSE）的足月儿于生后6个月进行随访,行PDMS-2测试。3.对照组、轻度HIE组、中度HIE组、重度HIE组共80例,于生后24h内、第3天、第7天抽血,离心后留取血清,用ELISA方法测血清中的VEGF和PEDF;剩下的血细胞,先用淋巴细胞分离液提取淋巴细胞,然后加入Trizol液,放于-70℃保存,行定性PCR检测VEGF和PEDF的表达情况。4.RT-PCR检测:采用两步法进行RT-PCR检测。第一步反转录反应,反应条件为37℃15min→85℃5sec;人血管内皮生长因子（VEGF）上游引物的序列为:5’- GAGTGGTTGACCTTCCTCCA-3’;下游引物的序列为:5’-GGGCAGAGCTGAGTGTTAGC-3’;人色素上皮衍生因子（PEDF）上游引物的序列为:5’-AAGAACCTCAAGAGTGCCTCCC-3’;下游引物的序列为:5’-GCTGAGATCTGAATCCAAGCCA-3’。第二步为RT-PCR反应,反应条件为:95℃10sec→40×（95℃5sec,60℃30sec）。扩增产物在2%琼脂糖凝胶中电泳。结果:1.对于血清中的NSE水平,依据临床症状分度,各HIE程度组间比较,差异具有统计学意义（F=351.007,P=0.000）;由高到低排列为:重度HIE组（均数为79.953）,中度HIE组（均数为51.615）,对照组（均数为38.915）,轻度HIE组（均数为38.520）;各程度组间两两比较,除对照组与轻度HIE组比较,差异无统计学意义外（P=0.789）,其余各组比较,差异均有统计学意义（P=0.000）。血清中的NSE水平在三个不同时间点比较,差异有统计学意义（F=351.007,P=0.000）;由高到低排列为:24h内（均数为65.669）,出生第3天（均数为50.376）,出生第7天（均数为40.708）;其中,各时间点两两比较,差异均有统计学意义（P=0.000）。时间与HIE程度之间交互作用有统计学意义（F=72.295,P=0.000）。各程度组于出生24h内比较,除对照组与轻度HIE组比较,差异无统计学意义外（P=0.670）,其余各程度组间两两比较,差异均有统计学意义（P=0.000）。各程度组于出生第3天比较,除对照组与轻度HIE组比较,差异无统计学意义外（P=0.716）,其余各程度组间两两比较,差异均有统计学意义（P=0.000）。各程度组于出生第7天比较,对照组与轻度HIE组比较,差异无统计学意义（P=0.716）,对照组与中度HIE组比较,差异无统计学意义（P=0.967）,轻度HIE组与中度HIE组比较,差异无统计学意义（P=0.565）,其余各程度组间两两比较,差异均有统计学意义（P=0.000）。对照组、轻度HIE组内各时间点比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。中度HIE组、重度HIE组内各时间点比较,差异均有统计学意义（P=0.000）,其中,各时间点两两比较,差异均有统计学意义（P=0.000）。中度HIE组、重度HIE组患儿血清中NSE水平在出生24h内最高,逐渐下降,中度HIE组于出生第7天可下降到与对照组和轻度HIE组相仿水平。对照组与轻度HIE组,血清中的NSE水平变化不大。2.预后与出生时的临床症状有关,临床症状越重,预后越差。运动商数于各程度组间两两比较,除对照组与轻度HIE组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,其余各组两两比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。血清中NSE水平越高,患儿预后越差,预后各组间的NSE水平差异有显著性（F=41.336,P=0.000）;其中,预后优秀的NSE水平（均数49.0354）、中等（均数62.4848）、差（均数75.8833）。各组分别比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）。预后各组血清中的NSE水平与各时间段之间存在着交互效应（F=11.737,P=0.000）。3个不同时间点,血清中NSE水平差异有统计学意义（F=78.561,P=0.000）。预后各组内比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）。各时间点的预后各组间比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）,除24h内,中等组与差组差异无统计学意义外（P＞0.05）,余两两比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）。血清中NSE水平下降越慢,预后越差。3.对于血清中PEDF水平,不同程度的HIE组间差异有统计学意义（F=293.609,P=0.000）;由高到低分别为:轻度HIE组（均数为3.743）,对照组（均数为3.735）,重度HIE组（均数为2.081）,中度HIE组（均数为1.991）;其中,除对照组与轻度HIE组比较,差异无统计学意义（P=0.922）;中度HIE组与重度HIE组比较差异无统计学意义（P=0.268）;其余各组之间两两比较,差异均有统计学意义（P=0.000）。不同时间点之间的差异有统计学意义（F=7.328,P=0.001）;由高到低分别为:出生第3天（均数为3.122）,出生24h内（均数为2.787）,出生第7天（均数为2.753）;其中,除出生24h内与出生第7天比较,差异无统计学意义外（P=0.733）,出生24h内与出生第3天比较、出生第3天与出生第7天比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）。时间与HIE程度组之间交互作用有统计学意义（F=2.210,P=0.045）。各程度组于出生24h内比较,除对照组与轻度HIE组比较,差异无统计学意义（P=0.828）;中度HIE组与重度HIE组比较,差异无统计学意义（P=0.721）;其余各程度组间两两比较,差异均有统计学意义（P=0.000）。各程度组于出生第3天比较,除对照组与轻度HIE组比较,差异无统计学意义（P=0.697）;中度HIE组与重度HIE组比较,差异无统计学意义（P=0.613）;其余各程度组间两两比较,差异均有统计学意义（P=0.000）。各程度组于出生第7天比较,除对照组与轻度HIE组比较,差异无统计学意义（P=0.637）;中度HIE组与重度HIE组比较,差异无统计学意义（P=0.262）;其余各程度组间两两比较,差异均有统计学意义（P=0.000）。对照组和轻度HIE组于各时间点比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。中度HIE组和重度HIE组于各时间点比较,差异均有统计学意义（P=0.000）,其中,除中度HIE组的出生24h内与第7天比较,差异无统计学意义（P=0.076）,重度HIE组出生24h内与第7天比较,差异无统计学意义（P=0.718）,其余各时间点比较,差异均有统计学意义。4.血清中的VEGF水平,不同程度的HIE分度血清中VEGF水平间的差异无统计学意义（F=0.467,P=0.707）。不同时间点的PEDF水平之间的差异无统计学意义（F=0.995,P=0.372）。血清中VEGF水平,HIE程度与时间的交互效应不显著（F=1.047,P=0.397）。结论:1.血清中NSE含量及其变化与HIE患儿脑损伤程度有关,脑损伤程度越重,其血清中NSE含量越高,轻度HIE组血清中NSE水平升高不明显,中度HIE组进一步升高,重度HIE组升高最显著。血清中NSE含量与时间段有关,高峰值在24h内,然后下降,中度HIE组于生后第7天,降至与对照组相似。2.出生时,HIE临床症状越重,患儿预后越不好;出生时血清中NSE水平越高,患儿预后不良的机会越大;血清中NSE水平下降越慢,预后越差。3.临床症状重,血清中的PEDF水平越低;血清中PEDF水平在各时间点不同,以第3天为高,24h内、第7天基本相似。VEGF水平不随着时间的变化和脑损伤的严重性而变化,不受PEDF的变化而变化。
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