论文摘要
全身感染或脓毒症是严重创伤较为常见的并发症,目前对其救治仍缺乏有效手段,提示创伤早期预防感染的发生具有重要意义。应激,即神经内分泌反应,伴随创伤而即刻发生,众多研究显示神经内分泌反应对免疫功能具有重要的调控作用,但其具体分子机制不明。HPA轴和SAM轴是机体主要神经内分泌反应轴,糖皮质激素、肾上腺素和去甲肾上腺素是其主要激素。内质网是细胞蛋白合成与分泌的主要场所,对维持细胞功能至关重要,内质网应激是一种保护性的细胞反应;模式识别受体在感染时识别细菌各成分和介导效应细胞活化方面发挥关键作用。为此,本课题围绕主要应激激素对巨噬细胞功能的影响及其可能分子机制,重点开展以下三个方面的研究:（1）皮质酮、肾上腺素和去甲肾上腺素对巨噬细胞免疫功能的影响;（2）内质网应激在激素对巨噬细胞免疫调控中的作用;（3）主要应激激素对LPS激活巨噬细胞的影响,并初步探讨模式识别受体在此过程中的作用。旨在揭示创伤早期神经内分泌反应对巨噬细胞免疫功能的影响及其分子机制,为创伤感染的早期预防与后期救治提供新思路。方法:（1）检测巨噬细胞黏附、趋化、吞噬和分泌TNFα功能,以观察其免疫功能的变化情况。（2）RT-PCR法检测内质网应激关键因子GRP78、XBP1基因表达情况;以诱导剂毒胡萝卜素诱导巨噬细胞内质网应激;XBP1-RNAi慢病毒感染以干扰巨噬细胞XBP1基因表达。（3）RT-PCR法检测CD14、SR和TLR4等几种模式识别受体基因表达情况;转染CD14siRNA以干扰巨噬细胞CD14基因表达。结果:（1）低浓度皮质酮、肾上腺素和去甲肾上腺素可显著增强巨噬细胞黏附、趋化和吞噬功能,促进其分泌TNFα,高浓度对其无影响。（2）免疫增强所对应浓度的皮质酮、肾上腺素和去甲肾上腺素可明显促进巨噬细胞GRP78和XBP1基因的表达;以诱导剂毒胡萝卜素诱导巨噬细胞内质网应激可明显增强其趋化、吞噬和分泌TNFα功能;以XBP1干扰慢病毒转染阻断内质网应激反应后,巨噬细胞吞噬和分泌TNFα功能明显降低。（3）低浓度皮质酮、肾上腺素和去甲肾上腺素预处理促进LPS诱导巨噬细胞吞噬和分泌TNFα,高浓度则出现抑制作用;活化巨噬细胞所对应浓度的皮质酮、肾上腺素和去甲肾上腺素可促进巨噬细胞CD14和SR基因的表达;转染CD14siRNA降低细胞CD14mRNA水平后,巨噬细胞的吞噬和分泌TNFα功能明显受抑。结论:一定浓度主要应激激素可增强巨噬细胞免疫功能,内质网应激是其重要机制;一定浓度的应激激素可增敏LPS对巨噬细胞的活化,此过程与模式识别受体表达水平的升高密切相关。提示创伤早期适度的神经内分泌反应可增强机体免疫功能,并增敏继发感染对免疫细胞的活化作用,内质网应激和模式识别受体CD14、SR表达升高分别起到重要作用。
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