灵芝中微量元素分析和三萜类化合物的分离提取及指纹图谱的研究

论文摘要

灵芝（Ganoderma）一直以来就是一种珍贵且疗效显著的中药材,而灵芝三萜是灵芝中一大类具有生物活性及药用活性的化合物。本实验对灵芝三萜的微波提取技术、灵芝中微量元素的测定、高效液相指纹图谱的建立及应用以及利用逆流色谱分离灵芝三萜的色谱条件进行了一定的研究,结果如下:1)通过ICP-AES法研究了灵芝中的微量元素的种类及含量。微量元素的含量差异存在于在各个样品之间,而且没有很强的规律性,很难进行统一的归纳。2)赤灵芝中三萜类化合物的液相色谱洗脱条件:流动相A乙腈,B水+1%乙酸（0-5 min A 10-15%,5-10 min A 15-30%,10-15 min A 30-40%,15-20 min A 40-45%,20-30 min A 45%-50%,30-40 min A 50%）。流速1 mL/min,检测波长254 nm,进样量:10μL,Waters C18柱。并运用中药色谱指纹图谱相似度评价体系对十种不同地区的赤灵芝样品进行三萜色图谱分析,建立了赤灵芝对照指纹图谱,此图谱对赤灵芝具有一定的代表性。分析其他品种的灵芝后,可知不同品种灵芝之间三萜色谱图具有显著的差异性。3)建立最佳的微波提取灵芝三萜的条件:提取温度75℃、功率870 w、液料比33 mL/g、提取时间17 min。微波提取灵芝三萜类化合物的平均得率达1.043%。4)建立逆流色谱条件初步分离灵芝三萜,其色谱条件为:正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=12:24:16:9（v/v）,上相为固定相,转速850 rmp/min,流动相流速为1.2 mL/min。结合制备液相分离得到两种灵芝化合物,纯度分别为87.24%与91.46%。通过液质联用分析这两种化合物的分子量为474,458。通过对比以往的文献可知化合物Ⅰ可能为Lucidenic aid B和Lucidenic acid E1,化合物Ⅱ可能为Lucidenic acid A。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 灵芝三萜的种类及结构特点
• 1.2 灵芝三萜的提取方法
• 1.3 灵芝三萜的分离方法
• 1.4 逆流色谱在萜类化合物分离中的应用
• 1.5 灵芝三萜的分析方法
• 1.5.1 化学定性
• 1.5.2 灵芝三萜的结构分析
• 1.6 灵芝三萜在灵芝中建立指纹图谱的研究进展
• 1.6.1 研究进展
• 1.6.2 中药指纹图谱的发展趋势
• 1.7 研究的目的、意义及内容
• 1.8 创新点
• 第二章 ICP-AES法分析灵芝中的微量元素
• 2.1 试验材料与仪器
• 2.1.1 原材料
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 试验仪器
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 样品预处理
• 2.2.2 湿法消解
• 2.2.3 仪器条件
• 2.2.4 工作曲线绘制
• 2.3 结果
• 2.3.1 元素的检测限
• 2.3.2 试样测定
• 2.3.3 回收率实验
• 2.4 讨论
• 2.5 本章小结
• 第三章 不同种类及地区灵芝中的三萜化合物液相色谱分析
• 3.1 试验材料与仪器
• 3.1.1 原材料
• 3.1.2 试剂
• 3.1.3 主要仪器及设备
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 灵芝样品的前处理
• 3.2.2 HPLC条件
• 3.2.3 方法的稳定性
• 3.2.4 仪器的精密度
• 3.2.5 重现性试验
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 液相色谱流动相条件建立
• 3.3.2 方法的稳定性
• 3.3.3 仪器的精密度
• 3.3.4 重现性试验
• 3.3.5 不同地区赤灵芝中的灵芝三萜液相图谱分析
• 3.3.6 不同种类的灵芝样品的液相色谱图
• 3.4 本章小结
• 第四章 微波提取灵芝中三萜类化合物的研究
• 4.1 试验材料与仪器
• 4.1.1 原材料
• 4.1.2 试剂
• 4.1.3 主要仪器及设备
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 灵芝样品前处理
• 4.2.2 微波辅助提取灵芝三萜
• 4.2.3 其它提取方法
• 4.2.4 齐墩果酸标准曲线的建立
• 4.2.5 灵芝三萜含量的计算
• 4.3 试验结果
• 4.3.1 微波提取灵芝三萜单因素试验
• 4.3.2 灵芝三萜微波提取工艺优化
• 4.3.3 连续性试验
• 4.3.4 对照试验
• 4.4 本章小结
• 第五章 赤灵芝子实体中灵芝三萜的分离纯化及简单结构鉴定
• 5.1 试验材料与仪器
• 5.1.1 原材料
• 5.1.2 试剂及材料
• 5.1.3 主要仪器及设备
• 5.2 试验方法
• 5.2.1 灵芝三萜粗提物的提取
• 5.2.2 薄层层析法
• 5.2.3 硅胶柱初步分离
• 5.2.4 Sephadex LH-20 纯化
• 5.2.5 选择逆流色谱溶剂体系
• 5.2.6 逆流色谱分离
• 5.2.7 HPLC检测条件
• 5.2.8 HPLC制备条件
• 5.3 结果与讨论
• 5.3.1 薄层层析法分离条件的选择
• 5.3.2 硅胶柱分离条件选择
• 5.3.3 硅胶柱分离结果
• 5.3.4 Sephadex LH-20 凝胶柱分离结果
• 5.3.5 逆流色谱分离
• 5.4 本章小结
• 结论与展望
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录