钩藤总碱抗高血压血管重塑、抑制血管平滑肌细胞增殖的研究

论文摘要

目的:钩藤总碱抗高血压血管重塑、抑制血管平滑肌细胞增殖的作用及其机制。方法:①在体实验观察钩藤提取物钩藤总碱对SHR尾动脉血压的影响,观察三级动脉血管光镜和体视学变化,检测SHR胸主动脉血管紧张素Ⅱ,胸主动脉平滑肌细胞内Ca2+变化,以研究钩藤总碱的降压、改善血管重塑及可能的机制②建立培养以血管紧张素Ⅱ诱导增殖的VSMC模型。检测指标及方法:MTT反映细胞DNA合成水平,平滑肌细胞生长曲线观察钩藤总碱对细胞生长的抑制作用,流式细胞仪观察VSMC周期、培养细胞内钙的浓度、c-myc基因表达。结果:钩藤总碱可以降低SHR尾动脉血压,与模型组相比有非常明显差异（P﹤0.01）,模型组大鼠胸主动脉、肾动脉和肠系膜动脉的管壁内膜、中膜和外膜均存在不同程度的增厚现象;胸主动脉、肾动脉和肠系膜动脉中膜厚度/管腔直径的比值明显升高,与正常对照组相比存在非常显著的差异（P﹤0.01）。与模型组比较,钩藤总碱组大鼠胸主动脉、肾动脉和肠系膜动脉中膜厚度/管腔直径的比值均明显降低（P﹤0.05）。同时钩藤总碱降低了SHR血管AngⅡ及平滑肌细胞内Ca2+含量,与模型组有显著差异及非常显著性差异（P﹤0.05、P﹤0.01）。离体培养VSMC AngⅡ诱导增殖组具有明显促进VSMC增殖作用;药物组在12h、24h均可抑制VSMC增殖,与模型组比较差异有显著性、非常显著性（P<0.05、P﹤0.01）。各组进行了VSMC生长曲线的描记,经含药物的培养基干预后,细胞生长曲线下移,钩藤总碱组抑制作用较卡托普利组明显。细胞周期研究发现钩藤总碱组与诱导增殖组相比,G1期增高（P﹤0.05）, S期明显降低（P﹤0.01）,可见钩藤总碱可以阻断细胞由G0/G1期向DNA合成的S期转化,从而抑制培养VSMC增殖的作用。与AngⅡ诱导增殖组相比,钩藤总碱组VSMC Ca2+表达水平显著降低（P<0.01）,与AngⅡ诱导增殖组相比,钩藤总碱组VSMCc-myc蛋白表达水平显著降低（P<0.01）,说明钩藤总碱抑制VSMC增殖的作用可能与降低细胞内钙水平及调控病理状态下c-myc基因过度表达有关。结论:钩藤总碱具有降压和改善血管重塑作用,其降压机制与降低血管局局部AngⅡ和VSMC Ca2+有关;改善血管重塑可能与降压和抑制VSMC增殖有关;抑制VSMC增殖的作用与其降低细胞内钙水平及调控病理状态下c-myc基因过度表达有关。

论文目录

• 提要
• Abstract
• 引言
• 第一部分 高血压治疗现状
• 1 高血压的发病—一个沉重的话题
• 2 高血压的治疗—成就与不足
• 2.1 西医对高血压的认识
• 2.2 当前治疗高血压的药物小结
• 2.3 控制高血压—任重道远
• 3 中医治疗高血压的进展与挑战
• 3.1 中医对高血压病因病机的认识
• 3.2 中药对高血压的治疗
• 3.3 中药对高血压病治疗的思考
• 3.4 中药提取物改善高血压的血管重塑—积极的探索
• 4 钩藤心血管药理研究
• 第二部分 在体、离体动物实验研究
• 实验一 钩藤总碱对SHR 降压及血管重塑影响的在体研究
• 1 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 饲养条件
• 1.3 实验药品
• 1.4 实验仪器
• 1.5 主要试剂
• 2 实验方法
• 2.1 分组方法
• 2.2 给药方法
• 3 取材及检测方法
• 3.1 尾动脉收缩压的测量方法
• 3.2 动脉的留取
• 3.3 胸主动脉、肾动脉和肠系膜动脉组织学观测
• 3.4 胸主动脉、肾动脉和肠系膜动脉体视学观测
• 3.5 各组胸主动脉血管紧张素Ⅱ含量的检测
• 2+检测'>3.6 胸主动脉平滑肌细胞Ca²⁺检测
• 4 统计学分析方法
• 5 实验结果
• 5.1 对各组SHR 尾动脉收缩压的影响
• 5.2 胸主动脉、肾动脉和肠系膜动脉病理组织学观测
• 5.3 胸主动脉、肾动脉和肠系膜动脉体视学观测
• 5.4 各组SHR 胸主动脉血管紧张素Ⅱ的浓度变化
• 5.5 各组SHR 胸主动脉平滑肌细胞Ca2+变化
• 实验二 钩藤总碱对Wistar 大鼠血管平滑肌细胞增殖影响的研究
• 1 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验药品
• 1.3 主要仪器
• 1.4 主要试剂
• 1.5 部分试剂配制
• 2 实验方法
• 2.1 大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞原代,传代培养及免疫组化鉴定
• 2.2 MTT 比色实验筛选药物合适剂量
• 2.3 MTT 法观察钩藤总碱对血管平滑肌细胞增值的影响
• 2.4 各组血管平滑肌细胞生长曲线的描记
• 2.5 钩藤总碱对血管平滑肌细胞生长周期的影响
• 2.6 钩藤总碱对血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响
• 2.7 钩藤总碱对血管平滑肌细胞c-myc 蛋白表达的影响
• 2.8 统计学分析方法
• 3 实验结果
• 3.1 培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞鉴定结果
• 3.2 实验用药药物剂量的筛选结果
• 3.3 钩藤总碱MTT 法对血管平滑肌增值的影响的结果
• 3.4 各组血管平滑肌细胞生长曲线的描记结果
• 3.5 钩藤总碱对血管平滑肌细胞生长周期影响的结果
• 3.6 钩藤总碱对血管平滑肌细胞Ca2+影响的结果
• 3.7 钩藤总碱对血管平滑肌细胞c-myc 蛋白表达影响的结果
• 第三部分 讨论
• 1 高血压病与血管重塑
• 1.1 高血压血管重塑的含义
• 1.2 高血压血管重塑的类型
• 1.3 高血压血管重塑的原因
• 2 血管重塑与VSMC 的增殖、凋亡
• 2.1 VSMC 的增殖与高血压血管重塑
• 2.2 VSMC 的凋亡与高血压血管重塑
• 3 高血压、VSMC 的增殖与细胞钙代谢
• 3.1 高血压与细胞钙代谢
• 3.2 VSMC 的增殖与细胞钙代谢
• 4 钩藤提取物抗高血压血管重塑及VSMC 增殖的实验效应分析
• 4.1 钩藤总碱对SHR 的降压分析
• 4.2 钩藤总碱对SHR 抗血管重塑的效应分析
• 4.3 钩藤提取物抗VSMC 增殖的实验效应分析
• 5 本研究的意义、不足
• 结语
• 参考文献
• 综述
• 附录
• 致谢
• 详细摘要