TGFβ 1siRNA对胎鼠肺成纤维细胞高氧损伤的干预作用

论文摘要

目的:通过观察TGFβ1 siRNA对体外培养的胎鼠肺成纤维细胞TGFβ1表达的影响,探讨TGFβ1siRNA对TGFβ1基因表达的调控作用,为进一步在动物活体内进行TGFβ1的RNA干扰实验奠定基础,为临床防治早产儿慢性肺疾病提供新方法。方法:原代分离、培养19天胎龄的SD大鼠肺成纤维细胞,并纯化、鉴定及建立成纤维细胞高氧损伤模型。将针对大鼠TGFβ1基因mRNA序列,设计、合成携带3条TGFβ1siRNA绿色荧光蛋白融合表达质粒载体,以及阴性质粒和空质粒,通过JetPET包裹分别转染上述高氧损伤的胎鼠肺成纤维细胞。于转染后24h、48h和72h收集细胞,在荧光显微镜下观察干扰效果,采用实时荧光定量PCR检测各组细胞TGFβ1基因表达情况,并计算干扰效率。结果:(1)成功分离、培养19天胎龄的SD大鼠肺成纤维细胞,并纯化、鉴定及建立成纤维细胞高氧损伤模型。每4只19d胎鼠肺组织可获LFs细胞数平均为(1.50±0.10)×10~8。纯度高达(96±1)%,细胞的活力为(97±2)%。(2)JetPET包裹质粒转染胎鼠肺成纤维细胞后在荧光显微镜下观察,可见转染后24h、48h和72h TGFβ1siRNA质粒组细胞绿色荧光强度均明显弱于阴性质粒组细胞,空质粒载体组未产生绿色荧光。(3)荧光定量PCR检测转染后胎鼠肺成纤维细胞TGFβ1mRNA表达量,其中转染后72h阴性质粒组表达量最高(P＜0.05),转染后24hTGFβ1siRNA质粒组表达量最低(P＜0.05);转染后24h、48h和72hTGFβ1siRNA质粒组TGFβ1mRNA表达量均显著低于阴性质粒组(P＜0.01),其基因干扰效率则依次递减,分别为97.3%、96.9%和71.7%。结论:TGFβ1siRNA表达质粒能够有效地从mRNA水平沉默胎鼠肺成纤维细胞TGFβ1基因,其基因干扰效率随转染后时间的增加而递减。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 简略词表
• 前言
• 1 课题研究意义
• 2 国内外研究现状及分析
• 3 合适动物的选择和细胞模型的建立
• 参考文献
• 第一部分 胎鼠肺FLs的原代分离、培养、纯化、鉴定及细胞活力的检测
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 TGFβ1siRNA对高氧损伤胎鼠肺成纤维细胞合成TGFβ1的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 在校期间发表的论文
• 参加的学术会议
• 致谢