论文摘要
喹噁啉类化合物是一类具有广谱抗菌和促生长效果的动物专用药,20世纪70年代以来在全世界范围内曾被广泛应用。一些早期品种如卡巴氧、喹乙醇由于其较强的毒副作用,已被不同程度地限制用作食品动物饲料添加剂。喹赛多为喹噁啉类的一个新品种,毒性极低,对猪、牛、羊及鱼等靶动物均有良好的抗菌促生长效果,能提高饲料转化率,且在靶动物体内吸收少,分布消除快,残留低,具有广阔的开发应用前景。但是,目前尚无喹赛多在蛋鸡上的研究报道。本试验通过动物饲养试验考察喹赛多对蛋鸡的生产性能以及蛋品质的影响,确定喹赛多在蛋鸡的最佳作用剂量和时程;建立鸡蛋中喹赛多及其两种主要代谢产物脱二氧喹赛多和喹噁啉-2-羧酸的高效液相色谱检测方法,考察三种化合物在鸡蛋和蛋鸡组织中的残留消除规律;并结合喹赛多对蛋鸡常见细菌的体外抑菌试验等指标来评价喹赛多对靶动物的有效性与安全性,从而为喹赛多在临床上的合理应用提供理论依据和技术支持。1.喹赛多对蛋鸡常见病原菌的体外抑菌活性研究采用微量稀释法测定喹赛多对蛋鸡4种14株常见病原菌的体外抗菌活性。喹赛多对鸡革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有较强的抑菌活性,对鸡白痢沙门氏菌和鸡大肠杆菌抑菌活性最强,其最小抑菌浓度(MIC)分别为4和16μg/mL,低于盐酸金霉素和杆菌肽锌。喹赛多对巴氏杆菌的抑菌效果比盐酸金霉素差;对金黄色葡萄球菌的抑菌效果与盐酸金霉素一样。结果表明,喹赛多抑菌活性与盐酸金霉素相近,比杆菌肽锌强,提示喹赛多可作为活性较强的抑菌剂使用。2.喹赛多对蛋鸡生产性能、蛋品质和血液生理生化指标的影响1260羽商品代尼克珊瑚粉蛋鸡随机分为7组,每组3个重复,每个重复60羽。对照组饲喂基础日粮(不添加任何抗菌药物),杆菌肽锌组在基础日粮上添加50mg/kg杆菌肽锌,5个喹赛多组分别在基础日粮上添加25、50、100、200和500mg/kg喹赛多。预试7d后转入正式试验,试验期90d。试验期间,每日记录各重复组的产蛋数、破软蛋个数、死淘情况,称取每个重复组的蛋重,每周计算耗料量、产蛋量、产蛋率、平均日采食量、平均蛋重、料蛋比、死淘率和破蛋率。在试验开始、第7周和第12周从每组随机取30枚蛋(每重复10枚),测定蛋重、比重、蛋壳厚度、蛋形指数及哈氏单位。存试验开始和结束时,从每组随机取10羽鸡,翼下静脉采血,测定血液生理生化指标。取试验期病死鸡的心、肝、脾、肾、肺、卵巢及其它肉眼可见病变组织,进行病理组织学检查。喹赛多对生产性能的影响:试验期间(33~44wk),喹赛多各剂量组对生产性能均有不同程度的影响。①产蛋率:各组中100mg/kg喹赛多组和杆菌肽锌组表现出最高的产蛋率(91.95%VS 91.56%),比对照组分别提高2.42%和2.05%。高剂量喹赛多组(200mg/kg、500mg/kg)产蛋率比对照组分别降低1.09%和3.37%,对产蛋率表现出负效应;②蛋重:各组中100mg/kg喹赛多组和杆菌肽锌组表现出最高的蛋重(60.89 VS 60.74),比对照组分别提高1.37%和1.12%。高剂量喹赛多组(500mg/kg)蛋重比对照组降低0.30%,对蛋重表现出负效应;⑧料蛋比:各组中100mg/kg喹赛多组和杆菌肽锌组表现出最低的料蛋比(1.83 VS 1.81),比对照组均降低7.11%。高剂量喹赛多组(200mg/kg)料蛋比比对照组提高2.54%,对料蛋比表现出负效应。这些结果表明,在33~44wk,蛋鸡日粮中添加100mg/kg喹赛多,可提高产蛋高峰期蛋鸡的产蛋率,增加产蛋量及蛋重,改善饲料报酬,且100mg/kg喹赛多效果与杆菌肽锌效果相当,而高剂量喹赛多有降低生产性能的趋势。因此,喹赛多在蛋鸡日粮中适宜添加量100mg/kg,最佳添加时间为90d。喹赛多对蛋品质的影响:试验期间,25mg/kg~100mg/kg喹赛多组可显著改善蛋品质。在试验中期(39wk),25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、500mg/kg喹赛多组可使蛋壳厚度比对照组分别提高5.26%、5.26%、5.26%(P<0.01)和2.70%(P<0.05),比杆菌肽锌组分别提高5.26%、5.26%、5.26%(P<0.01)、2.70%(P<0.05)。100mg/kg、200mg/kg喹赛多组哈夫单位比对照组分别显著提高9.73%和9.16%(P<0.05),且比杆菌肽锌组分别显著提高8.60%和8.02%(P<0.05)。在试验后期(44wk),50mg/kg、100mg/kg喹赛多组可使蛋壳厚度比对照组分别提高2.78%、5.41%,但差异不显著。哈夫单位比对照组分别提高1.41%和2.66%,但差异不显著。喹赛多对蛋重、比重和蛋形指数无明显影响(P>0.05)。结果表明,日粮中添加25mg/kg~100mg/kg喹赛多可有效提高蛋壳厚度和哈夫单位。喹赛多对血液生理生化指标的影响:25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg喹赛多组的红细胞数量和红细胞压积高于对照组(P>0.05)和500mg/kg喹赛多组(P<0.05)。100mg/kg喹赛多组的血糖高于对照组(P<0.05)和500mg/kg喹赛多组(P<0.01)。500mg/kg喹赛多组的血清Na+浓度显著低于对照组(P<0.05)。其它血清生化指标各组间无显著差异。试验期间,试验鸡各生理生化指标均在正常生理指标参考范围内,说明喹赛多长期饲喂对蛋鸡无明显不良反应。喹赛多对组织病理学的影响:病理学检查心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏和卵巢,未见有毒理学意义的改变,表明喹赛多对蛋鸡无明显不良影响。3.喹赛多在鸡蛋和蛋鸡可食性组织中的残留消除研究定量分析方法:按照国际生物样品中药物定量分析方法的要求,建立了鸡蛋中喹赛多、脱二氧喹赛多及喹噁啉-2-羧酸残留检测的高效液相色谱(HPLC)方法。鸡蛋样品酸化后,再用乙腈/氯仿(1:4,v/v)混合液提取,正己烷去脂,用HPLC测定。喹赛多与脱二氧喹赛多色谱柱为Agilent TC-C18柱。流动相为乙腈-水,洗脱程序为:0min,乙腈20%,水80%;8min,乙腈20%,水80%;12min,乙腈25%,水75%;25min,乙腈25%,水75%。紫外检测器波长为305nm,流速为1.0mL/min。结果表明:喹赛多与脱二氧喹赛多在鸡蛋中的最低定量限均为40μg/kg。喹赛多和脱二氧喹赛多标准工作液浓度在40μg/L~1600μg/L范围内,药物峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为rCVA=0.9996和rDEO-CVA=0.9996。添加浓度为40μg/kg、80μg/kg和160μg/kg时,喹赛多和脱二氧喹赛多在鸡蛋中的回收率在68.32%~83.28%间,日间相对标准偏差在5.64%~10.58%间。鸡蛋样品在偏磷酸甲醇中水解,乙酸乙酯提取,磷酸盐缓冲溶液反萃取,用OasisTM max柱净化,HPLC测定。喹噁啉-2-羧酸色谱柱为Agilent HC-C18柱。流动相为乙腈-1%甲酸水溶液(20:80;v/v),流速为1.0mL/min。紫外检测器检测,检测波长320nm。结果表明:喹噁啉-2-羧酸在鸡蛋中的最低定量限为4μg/kg。在20μg/L~800μg/L范围内,药物峰面积与浓度呈良好的线性关系(r=0.9996)。添加浓度为4μg/kg、8μg/kg和16μg/kg时,喹噁啉-2-羧酸在鸡蛋中的回收率在69.14%~77.15%,日间相对标准偏差为7.33%~8.96%。残留消除研究:饲养试验结束后,从100mg/kg喹赛多组中随机选出50羽鸡进行残留消除研究,每天收集其中20羽鸡所产的鸡蛋,连续收集2周,用HPLC法检测蛋中药物残留。另外30羽鸡分别于停药后12h、24h、2d、4d、6d随即宰杀,
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