鸡精液冷冻稀释液筛选和冷冻程序的研究

论文摘要

本论文从冷冻稀释液的筛选、优化和冷冻程序几个方面对鸡精液冷冻技术进行了研究。对于稀释液的筛选,本文先设计了8个冷冻稀释液基础液,分别进行大量的冷冻试验,最终筛选出一个冷冻效果较好的稀释液基础液,然后再对该基础液从渗透压,抗冻剂种类及添加浓度,卵黄、咖啡因和维生素E等物质的添加等方面进行了较为系统的优化,得到了一个冷冻效果较好的稀释液。然后又对影响精液冷冻效果的另一个因素——冷冻工艺从降温速度,平衡时间和冷冻剂型等方面进行了研究,确定了一个较为合理的冷冻程序。具体的试验结果如下:1.渗透压为422mOsm,pH为6.48的1号稀释液基础液冷冻效果最好,精子冻后活力达到0.72,精子复苏率达90.0%,存活时间达60min,极显著地高于其它液体。2.渗透压为420mOsm时精子的冻后活力、复苏率和存活时间分别为0.70、87.5%和75min,均极显著地高于渗透压为330mOsm、360mOsm、390mOsm、400mOsm、440mOsm时的冻后活力和复苏率(p<0.01)。3.鸡精液冷冻时的最佳抗冻剂为浓度为6%的甘油,其次为浓度为6%的DMSO,最后为浓度为10%的DMA和浓度为4%的乙二醇。联合抗冻剂冷冻效果与单一抗冻剂差异不显著。4.添加10%的卵黄、5mmol/L的咖啡因和15mg/mL的维生素E可显著地提高精子的冻后活力和复苏率。5.在鸡精液冷冻时,降温速度控制在0.55℃/min,在4℃下平衡120min冷冻效果较好。6.冷冻剂型以颗粒冻精为好。7.鸡冷冻精液的解冻以干解冻效果较好,一次解冻的精液颗粒数应尽可能少。8.高温解冻的解冻效果优于温水解冻(30℃～40℃)和低温冰水解冻(0℃～5℃),本试验中采用70℃高温解冻效果较好。9.采用离心去除甘油时,离心速度应控制在800rpm为宜。

论文目录

• 摘要
• Summary
• 第一章 文献综述
• 前言
• 一、精液冷冻保存技术研究进展
• 1. 精液冷冻保存研究意义
• 2. 精液冷冻保存研究概况
• 二、家禽精液冷冻保存技术研究进展
• 1. 家禽精液冷冻保存技术研究的沿革
• 2. 家禽精液的理化特性、化学组成和精子的形态结构特点
• 2.1 家禽精液的理化特性和化学组成
• 2.2 精子的形态结构特点
• 3. 禽类品系和个体在抗冻性上的差异和冷冻精液的遗传特性
• 4. 母禽繁殖生理特点
• 三、鸡精液冷冻的基本原理与方法
• 1. 冷冻原理
• 2. 冷冻方法
• 2.1 颗粒精液冷冻技术
• 2.2 PCR 管精液冷冻技术
• 2.3 离心管精液冷冻技术
• 四、影响鸡精液冷冻效果的因素
• 1. 稀释液
• 2. 抗冻剂
• 2.1 甘油
• 2.2 其他防冻剂
• 3. 平衡时间、冷冻速度和解冻温度
• 3.1 平衡时间
• 3.2 冷冻速率
• 3.3 解冻温度
• 4. 冷冻、解冻对精子受精能力和结构、代谢的影响
• 4.1 冷冻解冻后精子受精力的变化
• 4.2 冷冻解冻对精子结构和代谢的影响
• 五、鸡的冷冻精液人工授精概况
• 1. 鸡冷冻精液解冻方法
• 2. 母鸡的授精技术
• 2.1 授精方法
• 2.2 授精操作的技术要点
• 第二章 试验部分
• 试验一 鸡精液冷冻稀释液基础液的筛选
• 一、引言
• 二、材料与方法
• 1. 试验材料
• 1.1 试验动物
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 2. 方法
• 2.1 基础液的筛选
• 2.1.1 试验动物的饲养管理
• 2.1.2 稀释液的配制
• 2.1.3 采精
• 2.1.4 稀释与平衡
• 2.1.5 冷冻
• 2.1.6 解冻与镜检
• 2.1.7 数据处理
• 2.2 基础液的优化
• 三、结果与分析
• 1. 基础液的筛选
• 2. 基础液的优化
• 四、讨论
• 1. 基础液的筛选
• 2. 基础液的优化
• 五、小结
• 试验二 添加7 种冷冻保护剂对鸡精子冷冻效果的影响
• 一、引言
• 二、材料与方法
• 1. 试验材料
• 1.1 试验动物
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 2. 方法
• 2.1 不同抗冻剂及其浓度对鸡精液冷冻的影响
• 2.2 鸡卵黄对鸡精液冷冻的影响
• 2.3 咖啡因和维生素E 对鸡精液冷冻的影响
• 2.4 冷冻及解冻程序
• 2.5 数据处理
• 三、结果与分析
• 1. 不同抗冻剂及其浓度对鸡精液冷冻的影响
• 1.1 单一抗冻剂对鸡精液冷冻的影响
• 1.2 联合抗冻剂对鸡精液冷冻的影响
• 3. 鸡卵黄对鸡精液冷冻的影响
• 4. 咖啡因和维生素E 对鸡精液冷冻的影响
• 四、讨论
• 1. 抗冻剂及其浓度对鸡精液冷冻的影响
• 2. 鸡卵黄对鸡精液冷冻的影响
• 3. 咖啡因和维生素E 对鸡精液冷冻的影响
• 五、小结
• 试验三 鸡精液冷冻保存程序的优化
• 一、引言
• 二、材料与方法
• 1. 试验材料
• 2. 主要试验方法
• 2.1 降温时间和平衡时间的优化
• 2.2 不同冷冻剂型对冷冻效果的影响
• 2.3 不同解冻方法和放入的颗粒数对冷冻效果的影响
• 2.4 不同解冻温度对解冻效果的影响
• 2.5 解冻后离心去甘油对冷冻效果的影响
• 三、结果与分析
• 1. 不同降温时间和平衡时间对鸡精液冷冻的影响
• 2. 不同冷冻剂型对鸡精液冷冻的影响
• 3. 不同解冻方法和放入的颗粒数对解冻效果的影响
• 4. 不同解冻温度对解冻效果的影响
• 5. 解冻后离心去甘油对冷冻效果的影响
• 四、讨论
• 1. 降温时间和平衡时间对鸡精液冷冻的影响
• 2. 不同冷冻剂型对鸡精液冷冻的影响
• 3. 不同解冻方法和放入的颗粒数对解冻效果的影响
• 4. 不同解冻温度对解冻效果的影响
• 5. 解冻后离心去甘油对冷冻效果的影响
• 五、小结
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介
• 导师简介