猪源致病性沙门氏菌耐药基因PCR和基因芯片检测技术研究

论文题目: 猪源致病性沙门氏菌耐药基因PCR和基因芯片检测技术研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 遗传学

作者: 马孟根

导师: 王红宁

关键词: 沙门氏菌,耐药基因,基因芯片,检测

文献来源: 四川大学

发表年度: 2005

论文摘要: 本研以30株猪源致病性沙门氏菌为检测菌株,进行了各菌株的血清型鉴定,测定了该30株细菌对四大类抗生素的最低抑菌浓度,建立了其耐药基因的PCR检测技术,构建了耐药基因的基因检测芯片,建立了基因芯片检测技术,对30株沙门氏菌的耐药基因进行了检测,主要内容包括以下4个方面: 1、以猪源致病性沙门氏菌为被检菌株,采用玻片凝集试验进行了菌株的血清型鉴定,结果30株菌分属猪伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌和德尔俾沙门氏菌5个血清型。根据GenBank上注册的耐药基因序列,采用DNAStar Primerselect软件设计了24对引物,对沙门氏菌氨基糖苷类、四环素类、磺胺类和氯霉素类四大类抗生素的24种耐药基因进行了扩增,建立了耐药基因的PCR检测方法。对扩增到的11种DNA产物进行了序列测定,采用DNAStar MegAlign软件,将扩增到的DNA产物同GenBank上注册的相应耐药基因进行了比较分析,发现它们之间有很高的同源率(≥95.9%)。BLAST分析结果也发现,各DNA产物与相应耐药基因序列的一致性在90%以上。以上结果表明,11种扩增产物为11种耐药基因,氨基糖苷类耐药基因有aph(3’)-Ⅱa、aadA1、aadA2、aadB;四环素类耐药基因有tetA和tetC;磺胺类耐药基因有sulⅠ和sulⅡ;氯霉素类耐药基因有Catl、CmlA和floR基因。将获得的耐约基因在GenBank上进行了注册,注册号分别为:DQ205468、DQ205469、DQ205470、DQ205471、DQ205472、DQ205473、DQ205474、DQ205475、DQ205476、DQ205477、DQ205478。对猪源致病性沙门氏菌四大类抗生素的耐药基因进行全面扩增、测序分析、建立PCR检测方法,在国内还未见报道。

论文目录:

中文摘要

英文摘要

前言

第一章猪源致病性沙门氏菌耐药基因PCR检测方法的建立及耐药基因的序列分析

摘要

1 引言

2 材料与方法

3 结果

3.1 猪源致病性沙门氏菌的血清型鉴定结果

3.2 耐药基因PCR检测方法的建立及扩增结果

3.3 阳性扩增片段的序列测定及分析

4 讨论

第二章猪源致病性沙门氏菌耐药基因的PCR检测及与药敏试验的比较研究

摘要

1 引言

2 材料和方法

3 结果

3.1 猪源致病性沙门氏菌的药敏试验结果

3.2 耐药基因PCR检测结果

3.3 两种检测方法的比较

3.4 药敏试验结果与耐药基因检测结果的比较

4 讨论

第三章猪源致病性沙门氏菌耐药基因的基因检测芯片的构建及技术参数的确定

摘要

1 引言

2 材料和方法

3 结果

3.1 靶基因的纯化及浓度测定

3.2 探针纯化及浓度测定

3.3 靶基因和探针浓度对杂交信号的影响

3.4 靶基因在不同温度下的杂交结果

3.5 杂交时间对杂交信号的影响

3.6 数据输出与杂交信号判读

3.7 耐药基因基因芯片的构建及主要技术参数确定

3.8 芯片质量评价

4 讨论

第四章猪源致病性沙门氏菌耐药基因的基因芯片检测技术研究

摘要

1 引言

2 材料和方法

3 结果

3.1 耐釣基因的多重PCR扩增标记

3.2 混合探针的杂交

3.3 耐药基因检测芯片阳性判定标准确定

3.4 芯片灵敏度检测

3.5 芯片的保存期试验

3.6 耐药基因的基因芯片检测与PCR检测的比较结果

4 讨论

结论

文献综述

综述一、病原菌耐药性研究进展

综述二、基因芯片检测技术研究进展

参考文献

致谢

在读期间发表论文及获奖情况

声明

附件

附件1、在国际基因库(GenBank)登录的序列

附件2、耐药基因PCR结果

附件3、基因芯片杂交扫描图

发布时间: 2006-05-12

参考文献

[1].禽呼肠孤病毒野毒株σC基因、抗原性及致病性比较研究[D]. 王蕾.山东农业大学2007
[2].鸭短喙与侏儒综合征的病原学及感染鸭喙的转录组学[D]. 宁康.中国农业大学2018

猪源致病性沙门氏菌耐药基因PCR和基因芯片检测技术研究

猜你喜欢