GC-MS法同时检测动物组织中多种性激素类兽药残留的研究

论文摘要

本文是国家技术监督检验检疫总局下达的科研项目，项目编号为2002IK042。采用GC-MS技术，对动物组织中的己烷雌酚、己烯雌酚、己二烯雌酚、还原尿睾酮、表睾酮、雌酮、雌二醇、炔雌醇、雌三醇九种性激素进行同时检测。样品以乙腈为提取溶剂，经均质、超声、正己烷脱脂，依次通过C18、硅胶、氨基固相萃取柱净化，为了增强GC-MS检测激素类兽药的灵敏度，用50μLBSTFA:TMCS（99:1）的硅烷化衍生试剂添加50μL吡啶进行衍生化反应。该论文采用家用微波炉对九种激素类兽药进行辅助衍生反应。在输出功率为700W的条件下，考察不同反应时间（15120s）的微波效率，并与传统水浴比较。实验证明在输出功率为700W的微波炉中，衍生化反应60s，比传统水浴中70℃反应45min更具有优势。通过衍生反应对不同浓度的标准物质做线性方程，其线性范围为0.00150.48μg/mL，R2在0.99610.9982范围内。结果显示微波辅助衍生可以有效的促进样品中的性激素快速衍生，供GC-MS分析。GC-MS采用选择离子模式，毛细管柱选用0.25mm×30m×0.25μm的DB-5MS,以高纯He（99.999%以上）为载气，流量1.0mL/min，压力11.6psi（1psi=6.89kPa即79.9kPa），不分流进样2μL，进样口温度、接口温度均为280℃。程序升温条件为：初始炉温120℃，保持1min后以15℃/min的升温速率上升到250℃保持6min，再以5℃/min的升温速率上升到280℃保持6min。四极杆温度：150℃，EM电压：1600V，溶剂延迟：10min，四极杆温度：150℃。该实验提供了对猪肉、牛肉及动物肝脏、肾脏的检测方法，并采用外标法定量。动物组织中己烷雌酚、己烯雌酚、己二烯雌酚、还原尿睾酮、表睾酮、雌酮、雌二醇、炔雌醇、雌三醇的定性检出限范围为：0.11μg/kg，定量检测限范围为0.22μg/kg，均低于或等于欧盟残留限量标准。所有九种激素的回收率均高于72%，变异系数4.122%。该法可实现对样品进行灵敏、准确的定性定量分析。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 激素类兽药
• 1.2 食品中激素对人的影响
• 1.3 食品中激素的限量标准
• 1.4 激素类兽药检测方法现状
• 1.4.1 样品前处理技术
• 1.4.1.1 水解
• 1.4.1.2 提取
• 1.4.1.3 脱脂
• 1.4.1.4 净化
• 1.4.1.5 浓缩
• 1.4.1.6 衍生化
• 1.4.2 国内外检测手段
• 1.4.3 展望
• 1.5 任务来源
• 1.6 立题意义
• 1.7 技术路线及研究内容
• 1.7.1 确定技术路线和研究计划
• 1.7.2 方法验证
• 1.8 特色及创新之处
• 第二章 实验部分
• 2.1 实验试剂
• 2.2 仪器设备
• 2.3 试验材料
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 样品的制备
• 2.4.2 样品的提取
• 2.4.3 液-液萃取净化
• 2.4.4 SPE 净化
• 2.4.4.1 C18 小柱净化
• 2.4.4.2 硅胶柱净化
• 2.4.4.3 氨基拄净化
• 2.4.5 衍生反应
• 2.4.6 GC-MS 分析
• 2.4.6.1 色谱条件
• 2.4.6.2 质谱参数
• 2.4.7 定性测定
• 2.4.8 定量测定
• 2.5 结果计算
• 2.6 线性关系实验
• 2.7 回收率和精密度试验
• 2.8 检测低限测定
• 2.9 方法验证
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 衍生化条件的选择
• 3.1.1 衍生化试剂的选择
• 3.1.2 水浴衍生化条件选择
• 3.1.2.1 最佳反应时间的确定
• 3.1.2.2 最佳反应温度的确定
• 3.1.2.3 最佳衍生化试剂用量的确定
• 3.1.2.4 衍生化试剂的确定
• 3.1.3 微波条件的选择
• 3.1.3.1 微波反应原理
• 3.1.3.2 反应材料的耐受性实验
• 3.1.3.3 最佳衍生化时间的确定
• 3.1.3.4 微波法与传统水浴的比较
• 3.1.3.5 方法精密度
• 3.1.4 衍生方法的确定
• 3.2 色谱条件选择
• 3.2.1 色谱柱的选择
• 3.2.2 色谱分离条件
• 3.2.3 GC/MS 特征诊断离子的选择
• 3.2.3.1 己烷雌酚
• 3.2.3.2 己烯雌酚
• 3.2.3.3 己二烯雌酚
• 3.2.3.4 还原尿睾酮
• 3.2.3.5 表睾酮
• 3.2.3.6 雌酮
• 3.2.3.7 雌二醇
• 3.2.3.8 炔雌醇
• 3.2.3.9 雌三醇
• 3.3 样品提取方法
• 3.3.1 样品酶解
• 3.3.2 提取溶剂的选择
• 3.3.3 提取液脱脂
• 3.4 SPE 净化条件的选择
• 3.5 检测低限
• 3.6 方法的回收率和精密度
• 3.7 方法验证
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢