骨髓间充质干细胞移植调节烟雾吸入性损伤炎症反应的实验研究

论文摘要

目的探讨骨髓间充质干细胞的分离、培养、扩增及鉴定,分析移植后对兔烟雾吸入性损伤炎症反应及对肺损伤修复的作用并探讨其可能机制。方法首先以全骨髓培养法分离、体外培养及扩增成兔MSCs,采用MTT方法测定培养细胞生长曲线,并用流式细胞术鉴定MSCs抗原表达。建立烟雾吸入性损伤模型,伤后立即进行MSCs移植。将72只健康新西兰大耳白兔随机分为正常对照组（C,n=8）：经耳缘静脉注入10m1PBS;烟雾吸入性损伤组（S,n=32）：伤后立即经耳缘静脉注入10m1PBS;烟雾吸入性损伤+MSCs移植组（M,n=32）：伤后立即经耳缘静脉注入10ml含有第三代MSCs（1.0×107）的PBS。S、M组动物均在致伤前及致伤后2h、4h、6h经耳缘静脉采血离心分离血浆封装后冻存于-80℃冰箱中集中检测血浆细胞因子。C组采血作对照。采用酶联免疫吸附（ELISA）方法检测S组及M组致伤后2h、4h、6h（每个时间点各8只）及C组兔的血浆及肺组织匀浆液中TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-10的含量。S、M组动物均在致伤前及致伤后2h、4h、6h及24h分别活杀动物（每个时间点各8只）。分离右肺中叶用于测定肺水质量分数；右肺下叶10%甲醛固定用于病理学观察。分离左肺制备匀浆。C组取肺组织测定湿/干比值和病理学观察作为对照。结果1、全骨髓培养法培养的原代MSCs接种4天后形态均匀成梭形,生长增殖迅速,7-8天MSCs融合接近80%,传代培养生长良好。经流式细胞术鉴定,CD34（-）、CD45（-）、CD44（+）、CD105（+）,证明所培养的细胞为较纯的MSCs。2、烟雾吸入性损伤后2h、4h、6h,外周血中各炎症因子含量M组与相应S组对应时间点值相比均有显著差异（P<0.05）。在肺组织匀浆液中,M组与S组对应各个时间点相比,各促炎症因子含量均显著降低（P<0.05）,而抗炎因子IL-10仅在4h、6h显著升高（P<0.05）,在伤后2h无显著差异（P>0.05）。3、病理学观察：大体观察：从颜色、外观、包膜紧张度、充血.出血情况、渗出物等方面看,各时间点M组较S组显著好转,C组未见异常。组织病理学观察：从充血出血情况、肺泡隔情况、肺水肿、脱落上皮细胞、炎症细胞浸润等方面看,各时间点M组较S组显著好转,C组结构正常。结论1、MSCs移植能降低烟雾吸入性损伤早期促炎因子水平,升高抗炎因子水平,改善全身炎症反应,对烟雾吸入性损伤肺组织具有一定的保护作用。2、经过骨髓间充质干细胞治疗干预的烟雾吸入性损伤兔病理改变有所减轻。3、免疫调节可能是MSCs改善肺损伤的另一条重要机制。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 第2章 材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 仪器设备
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 配液
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 兔MSCs的体外分离、培养
• 2.2.2 兔MSCs生长曲线测定
• 2.2.3 兔MSCs的鉴定
• 2.2.4 烟雾吸入性损伤模型的建立
• 2.2.5 动物分组及实验实施
• 2.2.6 标本收集
• 2.2.7 主要指标检测
• 2.2.8 统计学处理
• 第3章 结果
• 3.1 MSCs生长曲线
• 3.2 MSCs的鉴定
• 3.2.1 形态学观察
• 3.2.2 流式细胞术鉴定
• 3.3 烟雾吸入性损伤模型的建立成功
• 3.3.1 临床表现
• 3.3.2 动脉血气分析
• 3.3.3 组织病理学观察
• 3.4 血清及肺组织匀浆液中炎症因子含量的变化
• 3.4.1 血清内致炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6及抗炎因子IL-10表达变化
• 3.4.2 肺组织匀浆液内致炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6及抗炎因子IL-10表达变化
• 3.5 肺水质量分数
• 3.6 组织病理学观察
• 3.6.1 大体形态观察
• 3.6.2 光镜下观察
• 第4章 讨论
• 4.1 MSCs的体外分离、培养
• 4.2 烟雾吸入性损伤模型的建立
• 4.3 MSCs对烟雾吸入性损伤炎症反应的影响
• 第5章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果
• 综述
• 参考文献