论文摘要
光散射技术自其建立以来，经过不断的完善和发展，已广泛应用于高分子聚合物科学，胶体科学及生命科学的研究中。1993年，Pasternack等通过在普通的荧光分光光度计上测定散射光信号建立了共振光散射（RLS）技术，该技术由于具有操作上的简便性和高度的灵敏性已引起人们的广泛关注，并成功应用于分析化学研究的各个领域。但是，共振光散射采用单一波长处的强度作为其表征手段容易受外界因素的干扰，导致信号不稳定，因此，有必要进一步发展共振光散射技术，克服其缺陷，扩展其应用范围。本文在研究普通光散射的基础上，提出了双波长散射／荧光比率法，并用于生物大分子的分析测定。研究内容包括下列三个方面：（1）在pH 4.6的乙酸-乙酸钠缓冲溶液中，环丙沙星与四苯硼钠作用在385.0 nm处产生的特征光散射信号（LS）能应用普通荧光分光光度计检测，从而建立了环丙沙星的光散射分析法。增强的光散射强度(ΔILS)与0.03～0.2μg／mL，0.2～2.5μg／mL两个范围内的环丙沙星溶液呈线性关系，检出限分别为7.4μg／mL，2.7μg／mL。本实验中研究了酸度、聚乙二醇600溶液的浓度、四苯硼钠溶液的浓度以及共存物质对LS强度的影响。与药典使用的高效液相色谱（HPLC）方法对照，结果表明LS方法可用于盐酸环丙沙星片剂中环丙沙星含量的测定。（2）在十二烷基苯磺酸钠（SDBS）胶束体系中，AgNO3与Γ生成稳定的AgI胶体，在437.0 nm处产生增强的共振光散射（RLS）信号，其增强的共振光散射强度(ΔIRLS)与0.03～4.4μg／mL范围内的Γ溶液呈线性关系，由此建立测定Γ的灵敏方法，检出限为2.6 ng／mL。此方法用于合成样的测定，回收率在99.3-106.7％之间，RSD小于2.8％。（3）在pH 9.62的BR缓冲溶液中，阳离子染料吖啶橙（AO）与鱼精DNA（fsDNA）通过静电作用形成二元复合物，导致AO在激发波长272.0 nm处，产生增强的散射光，而在发射波长534.0 nm处，出现荧光猝灭。利用共存的散射和荧光信号，我们提出了一种散射／荧光比率法。其272.0 nm处的散射强度与534.0 nm处的荧光强度比值（I／F）与0.02～1.4μg／mL范围内的fSDNA溶液成一定的线性关系，据此测定核酸的含量，检出限为5.7μg／mL。方法用于核酸的合成样的测定，RSD为1.3-2.0％。实验结果表明，比率法比单波长的散射法或荧光法灵敏度更高，线性范围更宽。