基于分子标记的辣椒杂交种真实性和纯度的检验

论文摘要

本研究首先优化了DNA提取方法，正交设计优化了SSR-PCR反应体系，采用SRAP和SSR两种分子标记技术，对由河南豫艺种业科技发展有限公司提供的一个辣椒杂交品种（JP-6和H-4两个不同地区待检测的种子）及其亲本自交系，以及待真实性鉴定的三个品种（JP-6、JP-7和JP-9）分别进行纯度的检测和真实性的鉴定。旨在为种质资源鉴定和杂交育种提供一定的理论依据，为现代生物技术应用于传统种子生产提供一个新的方向。本研究结果如下：1.采用了改良CTAB法和简易碱裂解法提取辣椒子叶部位DNA。结果显示CTAB法提取的DNA质量明显高于简易碱裂解法，但两种方法PCR结果一致，均可以满足SSR-PCR和SRAP-PCR扩增反应体系的需要。碱裂解法因操作简单、需时短、结果稳定，可用于辣椒PCR分析。2.通过正交设计建立了高效、低成本的SSR-PCR优化体系。试验结果表明：最适合辣椒SSR-PCR的反应体系是2号组合：Taq DNA聚合酶0.25U、dNTP0.2mmol/L、引物0.3μmol/L、循环次数30次。3.SSR引物筛选。采用21对SSR引物对辣椒F1代杂交种及其双亲进行PCR扩增筛选，其中有一对引物（CA885）在双亲和杂种F1中存在多态性，可区别双亲和F1。对这一引物进行重复扩增检测，扩增结果稳定。4.杂交种一代纯度鉴定。利用筛选出的引物CA885对JP-6和H-4两份辣椒品种F1杂交种96株单株分别进行纯度鉴定，结果分别为90.6%和86.0%。将JP-6和H-4的种子分别播种于田间，得到田间纯度检测结果分别为90.6%和91.3%，分子标记的检测结果与田间鉴定结果相近或稍低。5.三个辣椒品种真实性SRAP标记鉴定。利用高多态性16对SRAP引物对JP-6、JP-7和JP-9三个辣椒品种的父母本进行扩增，通过带谱的比对发现：JP-6和JP-7是同一个品种，而JP-9与JP-6、JP-7不是相同品种。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 1 文献综述
• 1.1 分子标特点及其在品种纯度鉴定中的优越性
• 1.2 分子标记技术的种类及其在作物品种鉴定中的应用
• 1.2.1 基于杂交的分子标记
• 1.2.2 基于 PCR 技术的分子标记
• 1.2.3 基于 PCR 与限制性酶切相结合的分子标记技术
• 2 引言
• 3 材料与方法
• 3.1 试验材料
• 3.2 试剂和仪器
• 3.2.1 DNA 提取试剂
• 3.2.2 PCR 扩增试剂
• 3.2.3 凝胶电泳试剂
• 3.2.4 SSR 引物和 SRAP 引物
• 3.2.5 仪器及耗材
• 3.3 试验方法
• 3.3.1 种子萌发
• 3.3.2 两种 DNA 提取方法
• 3.3.3 SSR-PCR 扩增反应体系的优化
• 4 结果与分析
• 4.1 辣椒基因组 DNA 提取及凝胶电泳检测
• 4.2 辣椒的高效、低成本的 SSR-PCR 优化体系
• 4.3 SSR 引物的筛选
• 4.4 F1 代种子纯度鉴定
• 4.5 品种真伪性鉴定
• 5 结论与讨论
• 5.1 结论
• 5.1.1 辣椒基因组 DNA 提取及凝胶电泳检测
• 5.1.2 PCR 优化体系
• 5.1.3 SSR 引物的筛选
• 5.1.4 F1 代种子 SSR 技术纯度鉴定
• 5.1.5 辣椒品种真伪性 SRAP 鉴定结果
• 5.2 讨论
• 5.2.1 分子标记检测种子纯度和真伪性的可行性
• 5.2.2 分子标记检测种子纯度和真伪性的局限性
• 5.2.3 本课题有待进一步研究的问题
• 参考文献
• ABSTRACT