银杏叶提取物对白介素-1β损伤大鼠关节软骨细胞的影响及机制研究

论文摘要

目的 根据银杏叶提取物对其它组织和细胞具有清除氧自由基和一氧化氮（NO），抑制炎症细胞中核因子-κB（NF-κB）核移位的研究，结合骨关节炎的发病机制中的NO和NF-κB的作用机制，本研究观察银杏叶提取物EGb对重组大鼠白介素-1β（rratIL-1β）损伤的大鼠膝关节软骨细胞的作用，并从自由基、一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶、NF-κB信号转导、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）等环节了解银杏叶提取物对受损伤软骨细胞的作用机制，为OA的预防和治疗摸索新的治疗药物和治疗途径。 方法 1 软骨细胞的培养及鉴定：半无菌环境下取1月龄清洁级wistar大鼠膝关节面软骨层，在无菌环境下消化得到软骨细胞，实验用细胞为第2代软骨细胞。采用检测培养物中的细胞外基质成分来确定软骨细胞，倒置显微镜观察细胞并照相。 2 软骨细胞与rratIL-1β（5μg／L）、rratIL-1β（5μg／L）+不同浓度地塞米松(10-7、10-6、10-5mmol／L)、rratIL-1β（5μg／L）+银杏叶提取物EGb761（40mg、80mg、160mg／L）共同孵育，含正常细胞组共8组，72小时后，MTT法检测软骨细胞的增殖受到的影响；考马斯亮蓝G-250检测细胞总蛋白。 3 同如上分组，软骨细胞在孵育24小时后取培养液上清，SOD、iNOS活性采用化学比色法测定，NO应用硝酸还原酶法测定，RT-PCR检测iNOSmRNA相对含量，观察EGb761对rratIL-1β损伤后的软骨细胞NO、iNOS活性、iNOSmRNA表达、SOD的影响。 4 软骨细胞与rratIL-1β（5μg／L）、rratIL-1β（5μg／L）+地塞米松(10-6mmol／L)、rratIL-1β（5μg／L）+银杏叶提取物EGb761（40mg、80mg、160mg／L）共同孵育，含正常细胞组共6组，ELISA法检测细胞转录因子NF-κBp65的活化情况及大鼠基质金属蛋白酶-13含量。 结果：1．培养细胞的细胞外基质部分存在酸性糖胺多糖呈异染性，呈浅蓝色或紫红色，鉴定培养细胞为软骨细胞的表型。细胞接种1周后在镜下可以见到较多呈圆形或多角形，分泌少量细胞外基质的软骨细胞，20天左右达到传代的标准。传代后，细胞变为多角形，细胞外基质分泌增多。 2．MTT法显示rratIL-1β对软骨细胞的增殖有明显的抑制作用，考马斯亮蓝试验显示细胞总蛋白分泌减少；地塞米松同EGb761均可对抗rratIL-1β的效应。EGb761的这种效应有剂量依赖性，而地塞米松没有这种效应。 3．rratIL-1β损伤后的软骨细胞NO、iNOSmRNA分泌增多、iNOS活性加强、SOD减少；地塞米松同EGb761均可对抗rratIL-1β增加NO、iNOSmRNA分泌、iNOS活性加强的效应，EGb761的对抗效应有剂量依赖性，而地塞米松没有这种效应；EGb761增加SOD作用强，并有明显的剂量依赖性；地塞米松改善软骨细胞分泌SOD的效应不明显。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 前言
• 第一章 银杏叶提取物对白介素-1损伤大鼠关节软骨细胞增殖及细胞总蛋白的影响
• 1.材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第二章 银杏叶提取物对白介素-1损伤软骨细胞自由基及一氧化氮体系的影响
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第三章 银杏叶提取物对白介素-1损伤软骨细胞核因子-KAPPAB及MMP-13的影响
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 结论
• 附图
• 文献综述
• 银杏叶提取物对一氧化氮和核因子-KAPPAB影响的研究进展
• 白介素-1和自由基在骨关节炎发病机制中的作用
• 致谢