论文题目: Cbfa1基因转移对成纤维细胞的调节作用及在脊柱融合中的作用
论文类型: 博士论文
论文专业: 外科学
作者: 郭国宁
导师: 周跃
关键词: 骨缺损,脊柱融合,核心结合因子,腺病毒载体,基因治疗,基因转染,组织工程,成纤维细胞
文献来源: 第三军医大学
发表年度: 2005
论文摘要: 骨不连、骨缺损、脊柱融合的治疗实际上是促进骨修复与重建的过程。骨诱导因子与细胞膜相应受体结合,通过信号转导,导致成骨。实验和临床研究均证实,骨不连的主要原因是成骨障碍,伴有骨折断端大量纤维瘢痕组织形成、并充填骨折断端,瘢痕组织主要由成纤维细胞构成,成纤维细胞和成骨细胞都起源于间充质干细胞,如果改变成纤维细胞的特征,使之具有特征性的成骨表型,具有非常重要的理论和临床意义。目前发现成骨细胞仅比成纤维细胞多表达两个基因,即骨钙素和Cbfa1。因此,从遗传学上讲,成骨细胞可以认为是更高级的成纤维细胞(sophisticated fibroblast)。Cbfa1 是成骨细胞的特异性转录因子。Cbfa1 调节成骨分化标志基因的表达,促进骨分化和骨形成。在骨诱导因子与Cbfa1 的关系中,一方面,骨诱导因子通过Cbfa1促进成骨;另一方面,Cbfa1 也可上调骨诱导因子或其受体的表达正反馈调节成骨,可以说Cbfa1 是多种骨诱导因子诱导成骨的共同信号分子,如果能将Cbfa1 基因转移间充质源性细胞就可能成骨。已经有研究证实:NIH3T3 细胞在逆转录病毒/Cbfa1 感染后,出现了VEGF 的基因和蛋白的表达,在BMP 的作用下向成骨表型转变。正是鉴于成纤维细胞和成骨细胞相同的起源、很小的基因表达差异、Cbfa1对于成骨细胞的重要性及特殊性引入本研究。研究目的: 体外Cbfa1基因转移能否改变成纤维细胞的表型而向成骨表型转变;体内Cbfa1对骨缺损和脊柱融合有无治疗作用。主要的方法及技术路线: 1. 脂质体法介导Cbfa1真核表达质粒转染NIH3T3,RT-PCR、生化方法、免疫细胞化学染色、Western-blot检测成骨标志基因Cbfa1、OCN、Type Collagen I、ALP、Bsp在转录水平及蛋白水平的表达。2. 制作小鼠的颅骨缺损模型,实验分为4组:(1) Cbfa1工程成纤维细胞移植组;(2)空白对照组;(3) 明胶海绵移植组;(4) NIH3T3移植组。术后8w大体、X线观察骨修复的情况。3. 构建AdEasy1/Cbfa1 病毒载体。PCR 扩增Cbfa1 的全长cDNA,T-A 克隆,亚
论文目录:
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论文正文 Cbfa1 基因转移对成纤维细胞的调节作用及在脊柱融合中的作用
前言
第一部分 Cbfa1 基因转移对NIH3T3 细胞的调节作用
材料与方法
结果
讨论
小结
参考文献
第二部分 Cbfa1 重组腺病毒的构建、纯化及表达
材料与方法
结果
讨论
小结
参考文献
第三部分 AdEasy1/Cbfa1 在脊柱融合的作用
实验一 兔皮肤成纤维细胞的培养及鉴定
材料与方法
结果
讨论
实验二 AdEasy1/Cbfa1 对成纤维细胞的调节作用
材料与方法
结果
讨论
实验三 AdEasy1/Cbfa1 在脊柱融合中的作用
材料与方法
结果
讨论
小结
参考文献
总结
致谢
照片
文献综述成骨细胞特异性转录因子Cbfa1 的研究进展
参考文献
研究生期间发表的文章
发布时间: 2005-11-08
参考文献
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