论文摘要
背景:老年多器官功能衰竭（MOFE）常常由肺功能不全引发,MOFE的发病诱因中,肺部感染占82.8%。随着“肺启动”假说的提出,这一临床现象得到了很好的解释。因此明确MOFE肺启动的机理,并针对性的预防和治疗,是降低MOFE发病率和死亡率的关键。我们先前的研究证明:老年大鼠与青年大鼠相比,在用酵母多糖刺激后所致的多脏器衰竭模型中,AM的凋亡率明显增加。老年AM的凋亡增加一方面造成感染的失控,另一方面造成炎症失控。因此认为,这很可能是老年肺部感染后炎症不易控制以及肺部感染或肺损伤后容易引起MOFE的重要原因,但其发病机制尚未明确。本研究主要探讨线粒体介导的凋亡通路及其相关因素在老龄大鼠急性肺损伤中的作用,其中重点探索线粒体介导的caspase蛋白酶相关凋亡级联反应对老龄大鼠急性肺损伤肺泡巨噬细胞凋亡的作用。 目的:探讨caspase-9及其相关基因在脂多糖（LPS）诱导的老年大鼠ALI时AM凋亡中的作用,为临床预防及治疗MOFE提供理论基础。 方法:本实验第一部分采用D-半乳糖对大鼠进行催老,并提取AM。采用光镜、电镜比较老龄以及青年大鼠AM细胞的形态学特征,并测定大鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）含量改变。第二部分使用脂多糖诱导大鼠急性肺损伤模型,在不同干预时间采用流式细胞仪测定细胞凋亡百分率,应用半定量RT-PCR技术检测caspase-9和Apaf-1 mRNA的表达水平,免疫组织化学染色技术检测Bcl-2和Bax蛋白表达,应用蛋白印记技术检测caspase-9蛋白的表达。 结果:D-半乳糖制备老龄大鼠模型,大鼠呈现出明显的衰老体征,D-gal组大鼠6周后血清SOD活性明显下降,血清MDA含量较实验前明显升高（P<0.01）。电镜观察发现老龄大鼠巨噬细胞内颗粒增多。在使用LPS干预后不同时间,老龄大鼠巨噬细胞凋亡率在0.5小时内即有明显增加,随着时间的延长凋亡率随之增加,在2小时左右达到高峰,2小时后凋亡率慢慢降低。caspase-9 mRNA的表达有所增强,干预后2h达到高峰。但Apaf-1 mRNA的表达维持正常水平,干预1h
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