1.肝癌癌基因p28GANK及其蛋白质产物在肝细胞癌临床病理过程中的功能和组织定位　2.免疫球蛋白IgA在组织器官膜表面异常聚集病理学过程原子力显微探测

论文摘要

Gankyrin蛋白,是从人类26S蛋白酶体中提纯的一种在人类肝细胞癌中克隆的新基因的产物:它是一种与人类视网膜母细胞瘤基因产物RB结合的肿瘤蛋白,参与肝细胞癌的发生。在本次研究中,针对一系列手术切除的肝细胞癌标本,我们分析了p28GANK蛋白在人肝细胞癌组织中的表达模式,试图阐明p28GANK蛋白与RB蛋白的相互作用关系。特别地,通过本次研究,我们初步了解了p28GANK蛋白的表达改变,RB蛋白的异常分布等因素对肝细胞癌的发生发展所产生的影响。所采用的p28GANK抗体按照常规方法自制备,抗体的有效性已经经过Western blot杂交方法检验。 我们采用免疫组织化学标记方法检测了55例人肝细胞癌组织中p28GANK的异常表达,初步揭示了这些表达改变与临床病理学特征的联系;采用RT-PCR方法初步测定了p28GANKmRNA在人肝细胞癌组织和5种肝细胞癌株中的表达。55例人肝细胞癌和癌旁肝组织胞浆均可见p28GANK阳性染色:与癌旁肝组织相比,在肝细胞癌组织中,p28GANK在细胞核中的着色具有显著优势（P=0.0001）。从这55例中随机抽取26例进行了RB免疫组织化学标记,与癌旁组织对照,其中有23例人肝细胞癌的细胞核RB表达呈波动性:15例降低,8例升高。核p28GANK的表达水平高低与核RB表达量的这种波动没有相关性。但是HCC细胞核p28GANK的过度表达却与HCC的Edmondson组织学分级显著相关:在11例Ⅰ-Ⅱ级HCC中有9例,在39例Ⅲ级HCC中有22例,在5例Ⅳ级HCC中有2例,分别呈现细胞核p28GANK过度表达,各占82%,56%,40%（p=0.004）。而p28GANK在HCC细胞核和细胞浆中的表达总量却与其细胞核中RB的表达量显著相关（r=0.475,p=0.019）。另一方面,p28GANK表达程度与突变型D53表达程度却没有共线性。RT-PCR证实,在所有受测的HCC和HCC细胞株中p28GANK

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 参考文献
• 第一部分 肝癌癌基因p28GANK及其蛋白质产物生物学特性研究
• 前言
• 试剂和仪器
• 1 主要试剂
• 2 主要试剂配制
• 3 组织及细胞系
• 4 仪器
• 实验方法
• 1 RT-PCR测定基因丰度
• 2 Histidine-p28GANK融合蛋白表达和纯化
• 3 p28GANK抗体制备和纯化
• 4 免疫组织化学染色
• 5 p28GANK融合质粒转染人类U2-OS细胞株共焦免疫荧光观测
• 实验结果
• 1 p28GANKmRNA在肝细胞癌组织和细胞系中的表达
• 2 Histidine-p28GANK融合质粒的表达和鉴定
• 3 p28GANK抗体特异性的WesternBlot鉴定
• 4 免疫组织化学染色结果
• 4.1 55例人肝细胞癌组织中p28GANK的表达
• 4.2 p28GANK的免疫染色定位和分布
• GANK与RB蛋白的相关性研究'>4.3 基于免疫组化的p28^GANK与RB蛋白的相关性研究
• 5 p28GANK融合质粒转染人类U2-OS细胞株的共焦免疫荧光观测
• 讨论
• 第二部分 p28GANK作为人肝细胞癌诊断性标志物的临床病理应用研究
• 前言
• 试剂和仪器
• 实验方法
• 1 病人和组织标本
• 2 p28GANK多克隆抗体的制备
• 3 p28GANK多克隆抗体的亲和纯化
• 4 p28GANK多克隆抗体的Western Blot鉴定
• 5 对各种人类肝脏肿瘤组织切片行免疫组织化学染色
• 实验结果
• 讨论
• 第三部分 原子力显微镜模拟探测免疫球蛋白IgA在组织膜表面异常聚集过程
• 前言
• 仪器、材料和实验方法
• 1 仪器和材料
• 2 IgA的生化提纯和鉴定
• 3 样品吸附衬底云母片基的表面处理
• 4 原子力显微镜观测样品的准备
• 5 IgA的原子力显微观测
• 实验结果
• 1 牛初乳免疫球蛋白A的生化提纯和鉴定
• 2 新剥离云母表面IgA的原子力显微镜观测
• 3 PLL处理云母表面IgA的原子力显微镜观测
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 致谢
• 附录一 创新实验设计（一）
• 创新实验设计（二）
• 附录二 文献综述（一）
• 文献综述（二）
• 附录三 研究生期间以第一作者和共同第一作者在SCI国际刊物发表的论文的编辑接受函和论文首页
• 附录四 研究生期间发表或出版的论著、论文以及研究生期间获得的科研基金资助
• 附录五 简历