滋补脾阴方药调节SNK-SPAR途径对Aβ损伤神经元保护机制研究

论文摘要

目的:阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）是中枢神经系统中最常见的神经退行性病变。在临床上主要表现为记忆、认知和行为的损伤。在组织病理学上主要以淀粉样斑块的沉积,神经纤维网缠结和突触丢失、功能障碍为主要的病理特征。而其认知功能下降与海马和皮质的突触丢失和功能障碍有密切关系。突触是神经元间进行信号传递的重要结构,它的破坏和丢失对神经系统的机能将产生巨大影响。突触功能障碍及缺失发生于阿尔茨海默病的早期,是AD疾病过程中的重要神经病理改变之一,并且是与认知功能下降最为密切的表现。因此对突触功能障碍及缺失进行有效的干预可能延缓AD进程。对突触的保护可以是一个重要的神经保护治疗措施实施的靶点。树突棘（dendritic spines）是存在于哺乳动物大脑神经元树突上的小突起,它构成哺乳动物中枢神经系统兴奋性突触传递的原始位点。伴随疾病而产生的棘形态的改变可能对智力功能有明显影响。在许多神经系统疾病中,包括各种形式的智力减退,树突棘的分布和结构都发生了变化。突触形态的改变涉及一条重要的途径即SNK-SPAR途径。血清诱导激酶（serum-inducible kinase, SNK）又叫马球样激酶2（Plk2）是马球样激酶（polo like kinases, Plks）家族成员之一。SNK和树突棘相关的Rap-特异性GTPase-活化蛋白[spine-associated Rap guanosine triphosphatase （GTPase） activating, SPAR]结合,可导致SPAR的降解,SPAR促进树突棘的生长和成熟。当海马神经元经诱导产生SNK时,会导致SPAR降解。因此,SNK可能通过SNK-SPAR途径影响树突棘形态和功能,最终影响了神经元的功能。本组既往的研究表明,滋补脾阴方药（Zibu Piyin, ZBPYR）有清除自由基、抗氧化、保护线粒体的功能,具有显著的抗衰老作用。因此探讨ZBPYR的抗衰老作用与保护突触结构和功能（尤其是对树突棘的形态和结构）的关系以及相关的分子机制,这样的突触保护策略对于AD及相关的以进行性脑功能障碍为特点的神经退行性疾病是有重要意义的。本实验建立Aβ毒性损伤的原代培养大鼠海马神经元模型,ZBPYR血清进行预保护,观察Aβ刺激前后与树突棘形态密切相关蛋白SPAR和SNK的表达变化情况,探讨ZBPYR对两种蛋白表达的调节作用,从而深入探讨ZBPYR可能的神经元保护作用的相关分子机制。并通过SNK的siRNA（Small interfering RNA ）转染入原代培养大鼠海马神经元,观察SPAR和SNK的蛋白表达变化,进一步研究和树突棘形态密切相关的SNK-SPAR途径。方法:1.用免疫荧光细胞化学方法观察与树突棘形态相关的重要分子SPAR,SNK等在Aβ处理后的蛋白表达变化情况,并观察滋补脾阴方药含药血清预保护后对SPAR和SNK表达变化的调节作用;2.脂质体转染SNK的siRNA后神经元中SNK、SPAR的蛋白表达变化情况。结果:1. Aβ引起与树突棘形态密切相关的蛋白SNK的增加和SPAR的减少并且促使其在细胞内的重新分布;2.加入滋补脾阴方药含药血清预保护后能够明显改善Aβ对原代培养大鼠海马神经元胞体和树突棘结构的损伤;3. SNK的siRNA转染入神经元后,SNK蛋白表达明显降低而SPAR蛋白表达显著升高。结论:1. Aβ1-40对原代培养大鼠海马神经元的树突和树突棘有明显的损伤作用,并导致SNK蛋白在神经元内的表达增高而SPAR蛋白表达降低;2.通过SNK的siRNA转染实验发现转染可以沉寂SNK表达,继而使SPAR蛋白表达升高,SNK表达变化在SNK-SPAR途径中起关键作用;3.滋补脾阴方药对原代培养大鼠海马神经元有保护作用,其作用机制可能是滋补脾阴方药通过调节SNK-SPAP途径维持树突棘的正常形态和结构来实现的。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• （九） 附图
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢
• 四、基金资助