导读:本文包含了肝内胆管上皮论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:原发性胆汁性胆管炎,间充质干细胞,自噬,STAT3信号通路
肝内胆管上皮论文文献综述
朱赟,姚根宏,唐小军[1]（2019）在《间充质干细胞移植干预2-OA/BSA诱导的原发性胆汁性胆管炎小鼠肝内胆管上皮细胞自噬蛋白表达的变化》一文中研究指出目的观察异基因间充质干细胞(MSCs)移植干预原发性胆汁性胆管炎(PBC)小鼠对肝内胆管上皮细胞(IBECs)自噬的调控作用及其分子机制。方法将30只C57BL/6小鼠随机分为模型组(n=18)、BSA组(n=6)和未处理组(n=6)。采用2-辛炔酸结合牛血清白蛋白(2-OA-BSA)注射诱导PBC模型。再将PBC模型小鼠随机分为模型组(PBC组,n=4)、MSCs移植干预组(MSCs组,n=6)和转录激活因子3(STAT3)抑制剂干预组(Stattic组,n=6)。采用灌流法分离肝内胆管树纯化IBECs,采用WB法检测IBECs组织STAT3/pSTAT3、p62、LC3、PKR/pPKR、Beclin-1蛋白、e IF2α/peIF2α、LAMP-1表达,采用RT-PCR法检测STAT3、LC3和p62-m RNA,使用电镜观察IBECs内自噬泡形成。结果模型组肝组织汇管区淋巴细胞浸润并有散在的肉芽肿形成,而MSCs和Stattic干预组小鼠汇管区炎性细胞浸润减少;模型组小鼠IBECs自噬蛋白Beclin-1、STAT3和pSTAT3表达较BSA组增强,而MSCs移植和Stattic干预组上述蛋白表达减弱;模型组和MSCs组p62 m RNA水平较BSA组下降,模型组STAT3 m RNA水平较BSA组下降。结论我们成功建立了2-OA-BSA诱导的PBC小鼠模型,MSCs移植干预通过下调STAT3表达减轻了PBC小鼠肝组织汇管区损害,可能与调控小鼠体内自噬相关蛋白表达有关。(本文来源于《实用肝脏病杂志》期刊2019年03期）
姚晨辉[2]（2019）在《LINC00311在LPS诱导人肝内胆管上皮细胞激活TLR4/NF-κB/c-myc信号通路从而上调内源性β-葡萄糖醛酸酶表达过程中的作用》一文中研究指出目的:肝内胆管结石在西方国家少见,在中国却非常常见,因其病变复杂、复发率高而成为较难治愈的一种良性胆道疾病。胆管切开取石或胆道镜下取石、肝切除等治疗方法仅能尽力清除结石,却不能有效预防结石复发。结石复发患者不得不再次接受手术或内镜取石治疗,治疗风险及难度均增加,同时也增加了患者疾病痛苦。因此,研究结石形成机制,探索预防或干预结石形成的有效方法具有重要临床意义。绝大多数肝内胆管结石是以胆红素钙为主要成分的色素性结石。细菌产生的外源性β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase,β-GD)可催化结合胆红素分解成游离胆红素,促使游离胆红素与钙结合形成胆红素钙,沉积后形成胆色素结石。目前研究发现,胆道感染后,胆汁中除了外源性β-GD以外,内源性β-GD也明显增高,亦可促进结合胆红素分解为游离胆红素,进而参与胆色素结石形成。因此,内源性β-GD活性调节机制的研究将有助于我们探索干预肝内胆管结石形成或复发的有效措施。为了研究内源性β-GD调节机制,本课题拟明确LPS是否通过TLR4/NF-κB/c-myc信号偶联刺激人肝内胆管上皮细胞内源性β-葡萄糖醛酸酶表达进而促进肝内胆管结石形成以及找出在此过程中发挥关键作用的lncRNA并探索姜黄素是否通过调控该关键lncRNA而发挥对人肝内胆管上皮细胞内源性β-葡萄糖醛酸酶表达的调控作用。研究方法:首先对肝内胆管结石患者的肝脏组织切片和正常对照肝组织切片进行NF-κB/c-myc信号通路分子和β-葡萄糖醛酸酶的免疫组化染色分析和对LPS诱导人肝内胆管上皮细胞炎症损伤模型作β-葡萄糖醛酸酶和TLR4/NF-KB/c-myc信号通路分子的Western blot检测以验证肝内胆管结石形成是否与β-葡萄糖醛酸酶的高表达和TLR4/NF-κB/c-myc信号通路的活化相关。再利用其明生物基因雷达httβs://www.gcbi.com.cn/gcuser/html/auth/login?source=generadar 在线预测出与TLR4/NF-κB/c-myc炎症通路的叁个炎症分子都有相关性的lncRNA以找出与LPS刺激相关的重要lncRNA。对预测得到的lncRNA在蛋白质-RNA互作数据库(PRIDB)进行验证。接着,我们用荧光定量PCR的方法验证所预测的lncRNA在LPS诱导人肝内胆管上皮细胞炎症损伤模型中是否表达上调,而且同时检测所预测的lncRNA在肝内胆管结石患者的肝脏病变胆管组织和正常肝内胆管组织中的表达水平。确定LINC00311为候选的lncRNA之后,就利用siRNA转染的方式将胆管上皮细胞中的LINC00311敲低后再观测LPS所诱导的炎症反应是否减轻,再利用慢病毒感染方式使人肝内胆管上皮细胞稳定过表达LINC00311,Western blot检测观察过表达LINC00311胆管上皮细胞的TLR4、NF-κB、c-myc和β-葡萄糖醛酸酶的表达情况以及用CCK8实验检测稳定过表达细胞的增殖能力;同时还用Western blot检测过表达胆管上皮细胞的上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物α-SMA、vimentin的蛋白水平以明确是否发生上皮间质转化。然后,我们在LINC00311高表达的人肝内胆管上皮细胞加入NF-κB的抑制剂JSH-23(Selleck公司)以阻断NF-κB/c-myc信号通路后再用Western blot检测β-葡萄糖醛酸酶的表达情况以确定目的lncRNA促进胆管上皮细胞的炎症反应主要是通过NF-κB/c-myc信号通路来起作用的。最后,利用姜黄素抑制LPS刺激胆管上皮细胞所引起的炎症反应。我们用荧光定量PCR的方法检测LINC00311在对照组、LPS处理组和姜黄素与LPS同时处理组的胆管上皮细胞中的表达以探索姜黄素对目的lncRNA是否有抑制作用,并且用Western blot检测叁组细胞的TLR4、NF-κB、c-myc通路分子和β-葡萄糖醛酸酶的表达情况以探索姜黄素是否通过抑制上述炎症通路的活化来抑制β-葡萄糖醛酸酶的表达。结果:肝内胆管结石患者的肝脏组织中TLR4/NF-κB/c-myc信号通路呈活化状态且β-葡萄糖醛酸酶高表达,在LPS诱导人胆管上皮细胞炎症损伤模型中,也得到了同样的结果(P<0.05)。利用其明生物基因雷达功能预测到LINC00311和LINC00467这两个lncRNA与TLR4/NF-κB/c-myc信号通路的叁个分子都相关,接着对预测得到的lncRNA在蛋白质-RNA互作数据库(PRIDB)进行预测,反向预测得到LINC00311可以和NF-κB相互作用。在LPS诱导建立的人胆管上皮细胞炎症损伤模型中,用荧光定量PCR方法证实了 LINC00311与炎症反应相关(P<0.05),且在肝内胆管结石患者的肝组织中也得到了同样的结果(P<0.05)。接着,利用siRNA转染干扰胆管上皮细胞的LINC00311则抑制了 LPS所引起的炎症反应(P<0.05)。而后将LINC00311过表达的慢病毒感染胆管上皮细胞则可直接上调β-葡萄糖醛酸酶和激活TLR4/NF-κB/c-myc信号通路(P<0.05),还可促进上皮间质转化(P<0.05)。过表达LINC00311不能促进HIBEβiC细胞增殖(P>0.05)。当LINC00311过表达的胆管上皮细胞中的NF-κB/c-myc信号通路被阻断,则β-葡萄糖醛酸酶又被下调(P<0.05)。最后,将LPS刺激的人胆管上皮细胞同时用姜黄素处理,发现姜黄素可以抑制LPS所引起的LINC00311的高表达(P<0.05),因而抑制了内源性β-GD的表达和相应的TLR4/NF-κB/c-myc信号通路的活化(P<0.05)。结论:这些结果给我们揭示了与肝内胆管结石发生密切相关的长链非编码RNA-LINC00311并证实了 LINC00311能够能通过激活TLR4/NF-KB/c-myc信号通路上调β-葡萄糖醛酸酶的表达进而发挥促进肝内胆管结石形成的作用。这就提供了一种新型的生物标记物可作为肝内胆管结石的潜在的治疗靶点。中药姜黄素可以通过下调LINC00311,进而抑制TLR4/NF-κB/c-myc信号通路激活,导致β-葡萄糖醛酸酶表达下降,发挥抑制肝内胆管结石形成的作用。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-03-01）
刘东红,林峰,杨再兴,张振成,仲人前[3]（2018）在《原发性胆汁性胆管炎肝内胆管上皮细胞TLR4及上皮-间质转化相关标志物的表达》一文中研究指出目的:探讨原发性胆汁性胆管炎(PBC)肝内胆管上皮细胞(IBEC)TLR4和上皮-间质转化(EMT)标志物的表达及二者的相关性。方法:应用免疫组织化学技术检测上海长征医院就诊的11例PBC患者和5例正常对照者(肝移植供肝者)的肝组织IBEC中TLR4和EMT相关标志物[E-钙黏蛋白和波形蛋白(Vimentin)]的阳性表达率,分析TLR4与EMT的关系及与PBC纤维化进展的相关性。结果:TLR4在正常对照组IBEC中无表达,在PBC组IBEC表达明显,各期患者TLR4阳性率分别为Ⅰ期28.6%、Ⅱ期41.6%、Ⅲ期64.0%、Ⅳ期73.1%,除Ⅰ期与Ⅱ期及Ⅲ期与Ⅳ期之间外,各组间差异均有统计学意义(P<0.01);E-钙黏蛋白在正常对照组IBEC中有表达,在PBC组IBEC中表达明显降低,各期E-钙黏蛋白阳性率分别为Ⅰ期84.0%、Ⅱ期48.1%、Ⅲ期23.0%、Ⅳ期19.0%,除正常对照组与Ⅰ期及Ⅲ期与Ⅳ期外各组间差异均有统计学意义(P<0.01);Vimentin在正常对照组IBEC中无表达,在PBC组IBEC中表达升高,各期Vimentin阳性率分别为Ⅰ期30.0%、Ⅱ期40.1%、Ⅲ期73.7%、Ⅳ期77.0%,除Ⅰ期与Ⅱ期以及Ⅲ期与Ⅳ期外,各组间差异均有统计学意义(P<0.01);PBC患者IBEC TLR4表达与E-钙黏蛋白呈显着负相关(r=-0.927,P<0.001),与Vimentin呈显着正相关(r=0.918,P<0.001),E-钙黏蛋白表达与Vimentin呈显着负相关(r=-0.918,P<0.001)。结论:PBC中IBEC TLR4表达明显增高,存在明显EMT现象,TLR4与EMT密切相关,且与PBC纤维化进展关系密切。(本文来源于《温州医科大学学报》期刊2018年08期）
黄清水[4]（2018）在《IL-17A诱导PBC肝内胆管上皮细胞EMT及其机制探讨》一文中研究指出一、研究背景及目的原发性胆汁性胆管炎(PBC)最终结局是肝硬化,典型病理学改变是肝内小胆管慢性非化脓性破坏性胆管炎及胆汁性肝硬化,肝内胆管上皮细胞(IBEC)损害明显。上皮-间质转化(EMT)与肝纤维化的发生发展密切相关,通过抑制EMT可延缓或阻断肝纤维化进程。体内EMT受多因素影响,IL-17A在EMT中作用近年倍受重视。因组织器官和疾病的差异,IL-17A在细胞EMT及器官纤维化中的研究结论不一。当前研究尚未明确IL-17A诱导IBEC-EMT及其分子机制,以及该病理过程在PBC发病中的价值。本研究结合临床病理及免疫组化研究了 PBC发展过程中IBEC-EMT发生情况以及IL-17A表达变化,并探索相关胞内信号途径以阐明IL-17A诱导IBEC-EMT的分子机制,初步阐明IL-17A诱导IBEC-EMT在PBC发病机制中的意义。二、研究内容1、通过PBC病例临床、病理分析及肝脏组织免疫组化,检测PBC患者是否发生IBEC-EMT,肝内胆管中IL-17A表达变化以及外周血IL-17A等炎性细胞因子的变化,评价以上指标与PBC发病的相关性。2、通过IBEC的体外培养,观察IL-17A诱导IBEC-EMT,并探索其可能的分子机制。2.1建立EMT经典细胞模型:分别用不同浓度TGFβ1干扰培养IBEC,在不同时间检测EMT相关标志物mRNA及蛋白表达水平的改变,主要为验证IBEC可以诱导出EMT,为下一步实验给予细胞、试剂、条件、方法等方面做准备。2.2观察IL-17A是否可诱导出IBEC-EMT:在不同时间应用不同浓度IL-17A干扰培养IBEC,观察细胞形态变化及检测EMIT相关标志物mRNA及蛋白表达水平,证实IL-17A可诱导出IBEC-EMT,并探索其最佳时间和浓度,为后续分子机制探索奠定基础。2.3应用siRNA沉默IBEC相应靶基因,检测IL-17A干扰培养IBEC可能信号通路上相关mRNA及蛋白表达变化情况,探索IL-17A诱导IBEC-EMT分子机制。3、IL-17A和 TGF-β1 共同干扰培养 IBEC,观察 IL-17A对 TGF-β1 诱导 IBEC-EMT的影响。叁、研究方法1、ELISA检测以下血清中的生物标志物及细胞因子:血清IL-17A、AMA-M2、IL-6、IL-8、IL-23、MIP3a/CCL20、TGFβ1 的检测。2、速率散射比浊法检测以下特定蛋白:血清IgG、IgA、IgM、C3、C4、ASO、RHF、CRP、轻链κ、轻链λ、游离KAP、游离LAM。3、HE染色直接观察肝脏的病理情况及病理分期。4、免疫组组织化学实验检测IBEC-EMT标志物及相关指标,包括CK7、CK19、Vimentin、E-cadherin、IL17A、IL17AR。5、IL-17A诱导IBEC-EMT及其分子机制,主要应用技术包括:细胞培养技术、流式细胞术、Quantitative real-time RT-PCR、Western blotting、siRNA 干扰等。四、研究结果1、PBC患者反映胆汁淤积TBIL、DBIL、GGT、ALP等多项生理生化指标均存在明显异常,血清IL-6、IL-8、MIP-3a、TGFβ1、IL-17A等多种相关炎性细胞因子水平明显升高。2、HE染色分析9例不同分期的(Ⅰ期3例、Ⅱ期4例、Ⅲ期2例)的PBC病例以及4例正常人肝组织的病理学改变,结果显示:PBC患者肝内胆管上皮细胞上皮标志物E-cadherin明显降低,间质标志物Vimentin明显增高,同时IL-17A、IL-17RA表达升高,提示在PBC发展过程中伴随IBEC-EMT的发生,且此过程可能与IL-17A介导的信号通路有关。3、TGFβ1诱导IBEC-EMT最佳浓度为5ng/ml,最佳时间为48h。4、IL-17A可诱导IBEC-EMT,最佳浓度为50ng/ml,最佳时间为48h。5、IL-17A干扰培养IBEC,转染siRNA-Act1可阻断IBEC-EMT过程,同时下游信号通路上Act1、P65/p-P65、p-IκB等多种信号蛋白表达异常。6、IL-17A和TGF-β1共同干扰培养诱导IBEC-EMT较单独应用明显。五、研究结论1、PBC患者多项生理生化指标异常,外周血清IL-17A等多种炎性细胞因子水平升高,可能与PBC的发病机制相关。2、PBC患者存在IBEC-EMT及肝内胆管上皮细胞IL-17A、IL-17RA高表达,IL-17A可能参与PBC肝内胆管IBEC-EMT。3、IL-17A 诱导 IBEC-EMT 可能是通过 IL-17A-IL-17RA-Act1-NF-κB 信号通路发挥作用。4、IL-17A与TGF-β1对IBEC-EMT过程起协同作用。(本文来源于《南方医科大学》期刊2018-05-01）
唐世芳[5]（2018）在《TLR4在脂多糖诱导大鼠肝内胆管上皮细胞EMT中的作用研究》一文中研究指出目的:探究胆总管内注射细菌脂多糖(LPS)在SD大鼠体内是否通过诱导Toll样受体4(TLR4)刺激肝内胆管上皮细胞(IBECs)发生上皮-间质转化(EMT),并观察对TLR4下游核转录因子NF-κB及snail的影响及其可能的作用机制。方法:1.健康SPF级SD雄性大鼠32只,体重在270±10 g范围内,随机将其分为四组(n=8/组),即假手术对照组:SH组、模型组:LPS组、TLR4 sh RNA+LPS组:KD组、阴性病毒对照+LPS组:NC组。2.KD组和NC组尾静脉分别注射腺病毒载体TLR4sh RNA和阴性对照病毒(1x109 PFU/只);96 h后,LPS组、KD组和NC组分别经胆总管逆行注射1 mg/kg LPS,SH组经胆总管逆行注射生理盐水作为对照,于48 h后分离保存肝内胆管组织。3.苏木素伊红(HE)染色观察胆管上皮细胞的组织病理学变化;实时定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹试验(Western bolt)检测所取标本中上皮标记物E-cadherin、CK7,间质标记物N-cadherin、MMP-2和TLR4的m RNA和蛋白表达量,以及核转录因子NF-κB p65的磷酸化水平和snail的蛋白表达。4.统计学分析:采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析,所有实验结果以均数±标准误(x±SED)表示,组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)法,P<0.05具有统计学意义。结果:1.与SH组相比,LPS组大鼠胆管TLR4 m RNA的表达显着升高(P<0.01);与LPS组和NC组相比,KD组中腺病毒TLR4 sh RNA抑制TLR4基因后TLR4 m RNA的表达显着降低(P<0.01,P<0.01)。TLR4蛋白表达与基因检测结果一致。2.LPS组上皮标记物E-cadherin、CK7的蛋白表达与SH组相比显着降低(P<0.01;P<0.01);而KD组中E-cadherin、CK7蛋白表达与LPS组和NC组相比明显升高(P<0.01,P<0.01;P<0.01,P<0.01)。E-cadherin、CK7 m RNA表达趋势与蛋白检测结果一致。3.LPS组间质标记物N-cadherin和MMP-2 m RNA的表达较SH组明显升高(P<0.01;P<0.01);而KD组中N-cadherin和MMP-2 m RNA的表达与LPS组和NC组相比显着下调(P<0.01,P<0.01;P<0.01,P<0.01)。N-cadherin和MMP-2的蛋白表达与基因表达结果一致。4.LPS组NF-κB p65的磷酸化水平及snail蛋白水平显着高于SH组(P<0.05;P<0.01);TLR4基因被抑制后,KD组NF-κB p65的磷酸化水平与snail蛋白表达较LPS组和NC组显着降低(P<0.05,P<0.05;P<0.01,P<0.01)。结论:脂多糖通过激活TLR4诱导大鼠肝内胆管上皮细胞发生EMT,其作用机制与NF-κB/snail信号通路有关。(本文来源于《遵义医学院》期刊2018-05-01）
刘梦奇[6]（2018）在《缺血再灌注对人肝内胆管上皮细胞上皮间质转变的影响及其机制》一文中研究指出目的1.研究缺血再灌注对人肝内胆管上皮细胞上皮间质转变(epithelial mesenchymal transitions,EMT)的影响。2.初步探讨缺血再灌注促进人肝内胆管上皮细胞发生EMT的机制。方法1.人肝内胆管上皮细胞(Human Introhepatic Biliary epithelial Cell,HIBEC)分为正常组和缺血再灌注组,分别在相应条件下培养和处理后收取蛋白。二喹啉甲酸(BCA)进行蛋白定量后,Western blot检测两组细胞中EMT相关蛋白(E-cadherin,Vimentin,FSP-1)的表达情况。2.浓度分别为0、5、10、15、20、25、30、35、40μmol/L的Hedgehog抑制剂环巴胺(cyclopamine)预处理人肝内胆管上皮细胞12h后,采用CCK-8检测其对细胞活性的影响,并绘制IC50曲线?CCK-8研究正常培养和缺血再灌注条件下加入Hh抑制剂与否及不同缺血再灌注时间对人肝内胆管上皮细胞生长的影响,并绘制生长曲线?Western blot检测正常培养和缺血再灌注培养条件下加入Hh抑制剂与否对人肝内胆管上皮细胞中SHH,SMO,Gli及EMT相关蛋白(E-cadherin,Vimentin)的表达情况结果1.Western blot结果显示缺血再灌注培养组人肝内胆管上皮细胞E-cadherin表达量低于正常培养组;而FSP-1和Vimentin蛋白表达量则高于正常培养组,并且这一现象在再灌注6h时最为明显。2.根据CCK-8测定Hedgehog抑制剂环巴胺对人肝内胆管上皮细胞活性的影响绘制IC50曲线,确定18.68μmol/L为环巴胺预处理细胞的最适宜药物浓度;为方便操作,在实验过程中,我们选取20μmol/L为预处理细胞的药物浓度。在CCK-8测定不同处理组人肝内胆管上皮细胞的生长曲线中,缺血再灌注组生长速率均低于正常培养组,并且在加药后1h、6h和12h时均有统计学意义(P<0.05);其中加药组又分别低于不加药组,并且这一现象在缺血再灌注处理组尤为明显(P<0.001)。Western blot检测发现相比于正常培养组,缺血再灌注组细胞SHH、SMO、Gli表达量均有上调,表明缺血再灌注处理后人肝内胆管上皮细胞中Hh信号通路被活化。采用环巴胺干预的方法对人肝内胆管上皮细胞进行预处理后,Gli的表达量明显减少,表明Hedgehog信号通路的活化作用被抑制;同时相比于单纯缺血再灌注组,药物预处理组细胞Vimentin的表达降低,而E-cadherin的表达量则增高,表明细胞上皮间质转变被抑制。结论1.缺血再灌注可以引起人肝内胆管上皮细胞发生上皮间质转变。2.缺血再灌注可能通过激活Hedgehog信号通路促进人肝内胆管上皮细胞发生上皮间质转变,阻断该信号通路可显着减轻这一过程的发生。(本文来源于《郑州大学》期刊2018-03-01）
邓世康,陈晓波,金焰[7]（2017）在《5-氟尿嘧啶抑制TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞间质化》一文中研究指出目的探讨5-氟尿嘧啶对TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞间质化的抑制作用,并探讨其作用机制。方法原代培养人肝内胆管上皮细胞,角蛋白19荧光染色鉴定;细胞分为:对照(normal)组,TGF-β1(TGF-β1)组,5-氟尿嘧啶(TGF-β1+5-FU)组;免疫荧光染色观察CK-19、E-cadherin、vimentin和α-SMA标记蛋白;Western blot检测细胞标记蛋白及TGF-β1表达量;Real-time PCR检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1 mRNA含量。结果原代培养的人肝内胆管上皮细胞呈多边形或者锥形,CK-19荧光染色为胞质着色;TGF-β1诱导72 h后,胆管上皮出现间质化表现,与正常组比较,vimentin、α-SMA和TGF-β1表达明显增强(P<0.05),CK-19和E-cadherin表达显着减弱(P<0.05),Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1 mRNA含量显着升高(P<0.05);5-FU抑制胆管上皮间质化,与TGF-β1组比较,CK-19和E-cadherin表达增强(P<0.05),vimentin、α-SMA和TGF-β1表达明显减弱(P<0.05),TGF-β1 mRNA和Ⅲ型胶原mRNA含量明显降低(P<0.05)。结论 5-FU通过下调TGF-β1的表达抑制胆管上皮细胞间质化。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2017年08期）
朱明远,余宏铸[8]（2017）在《脂多糖对人肝内胆管上皮细胞IL-6/STAT3信号通路的影响》一文中研究指出目的探讨脂多糖(LPS)对正常人肝内胆管上皮细胞(HiBECs)白介素(IL)-6/STAT3信号通路的影响。方法 HiBECs细胞常规体外培养,使用不同浓度的LPS(0、0.1、1、2、4、8μg/ml),分别作用该细胞24、48、72 h后,ELISA法检测IL-6的表达水平,确定LPS的最适刺激浓度及最佳刺激时间,再以其进行后续实验;RT-q PCR法测定c-Myc mRNA、Mcl-1 mRNA的表达情况;Western blot法测定p-STAT3/STAT3蛋白比例及c-Myc、Mcl-1蛋白的表达情况。结果 LPS能够促进HiBECs细胞IL-6分泌,并且在4μg/ml、24 h时IL-6的分泌量达最大(F=16.492、17.763,P<0.001、P<0.01);LPS刺激HiBECs细胞后,c-Myc mRNA、Mcl-1 mRNA表达上调(P<0.01);p-STAT3/STAT3蛋白比例增高(P<0.05),c-Myc(P<0.001)、Mcl-1(P<0.05)蛋白表达增多。结论 LPS能够激活HiBECs细胞IL-6/STAT3信号通路,并且可能通过该信号通路促进Mcl-1、c-Myc的表达。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2017年07期）
朱明远[9]（2017）在《脂多糖对人肝内胆管上皮细胞IL-6/STAT3信号通路的影响及意义》一文中研究指出目的研究脂多糖(LPS)刺激能否诱导正常人肝内胆管上皮细胞(HIBECs)白细胞介素-6(IL-6)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路的激活及对该信号通路下游因子c-Myc和髓样细胞白血病-1(Mcl-1)表达的影响;探讨LPS对HIBECs细胞增殖的影响及其可能存在的机制。方法(1)HIBECs细胞常规体外培养,使用不同浓度的LPS(0、0.1、1、2、4、8μg/ml)分别刺激该细胞,并分别作用24h、48h、72h,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各浓度、各时间点IL-6的表达水平,确定LPS的最适刺激浓度及最佳处理时间,再以其进行后续实验;(2)用前述所测LPS刺激HIBECs细胞,并设立正常细胞对照组,Western blot检测磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白和STAT3蛋白表达情况,确定pSTAT3/STAT3蛋白比例,探讨LPS能否激活IL-6/STAT3信号通路;(3)再以前述所测LPS干预HIBECs细胞,同时设立正常细胞对照组,分别采用荧光定量逆转录PCR(RT-q PCR)和Western blot测定c-Myc、Mcl-1的m RNA及蛋白表达水平,进一步探讨LPS刺激对IL-6/STAT3信号通路下游因子表达的影响;(4)用前述所测LPS刺激HIBECs细胞,同时设立正常细胞对照组及空白对照组,MTT测定细胞增殖率,探讨LPS刺激对HIBECs细胞增殖的影响。(5)运用SPSS16.0统计学软件对上述结果进行统计分析。结果(1)ELISA检测结果显示:LPS刺激能够促进HIBECs细胞分泌IL-6,并呈一定的时效、量效关系。在一定范围内随着LPS浓度的增加,IL-6的分泌逐渐增加,而且当LPS浓度为4μg/ml(F=16.492,P<0.001),刺激时间为24h时(F=17.763,P<0.01),IL-6的分泌量达最大,然后随LPS浓度的升高,刺激时间的延长逐渐下降;(2)Western blot结果显示:与正常细胞对照组相比,LPS刺激组p-STAT3/STAT3蛋白比例明显增高(t=6.022,P<0.05);(3)RT-q PCR结果显示:使用LPS处理后,HIBECs细胞c-Myc m RNA和Mcl-1 m RNA的表达明显上调,较对照组分别上升了约36倍(t=14.59,P<0.01)和2.4倍(t=19.10,P<0.01);Western blot结果显示:与正常细胞对照组相比,LPS处理组c-Myc蛋白(t=46.45,P<0.001)、Mcl-1蛋白(t=5.383,P<0.05)的表达显着增多;(4)MTT结果显示:LPS刺激能够促进HIBECs细胞增殖(t=10.66,P<0.01)。结论LPS刺激能够激活HIBECs细胞中的IL-6/STAT3信号通路,并能在m RNA和蛋白水平上提高该信号通路下游因子c-Myc和Mcl-1的表达,并且可能通过该信号通路介导HIBECs细胞的增殖。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2017-03-01）
王倩[10]（2016）在《MSC下调STAT3调节肝内胆管上皮细胞自噬通量治疗原发性胆汁性肝硬化》一文中研究指出目的 :原发性胆汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis,PBC)是一种慢性进展性胆汁淤积性自身免疫病。最近发现PBC患者的肝内胆管上皮细胞自噬功能异常,不能正常更新,进而发生衰老甚至凋亡,最终释放异常抗原引发免疫损害。研究发现间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)治疗PBC患者可改善其病情,但具体机制不明。本研究旨在探讨MSCs治疗PBC小鼠是否与调节PBC肝内胆管上皮细胞自噬相关。方法 :造模完成后,将小鼠随机分为4组:PBC模型组、MSCs治疗PBC组、STAT3拮抗剂治疗PBC组和对照组,24周处死小鼠,检测血清抗PDG-E2抗体、生化及肝脏病理。从肝脏中分离出肝内胆管束,Western Blot检测肝内胆管细胞的STAT3、p STAT3、p62、LC3、Beclin-1、e IF2α/磷酸化e IF2α的蛋白表达水平。RTPCR检测STAT3、LC3、p62的m RNA水平。电镜检测各组肝内胆管束自噬小体的数量。结果 :MSCs治疗组能明显降低小鼠血清抗丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基(抗PDC-E2)的水平(p<0.05)。MSCs治疗后能明显减少胆管区的炎症细胞浸润,未见肉芽肿形成,降低血谷酰转肽酶水平(p<0.05),且白蛋白有升高趋势。模型组Beclin-1水平较MSC组、STAT3拮抗剂组显着增高(p<0.05)。其余自噬相关蛋白P62、LC3在各组间均无明显差异。模型组的STAT3及p STAT3较对照组、MSC组及STAT3拮抗剂组均显着增高(p<0.05)。模型组P62及LC3m RNA水平均比对照组减低,MSC组及STAT3拮抗剂组较模型组升高(p<0.05)。电镜下模型组自噬小体数量较对照组减低。结论 :PBC自噬存在异常。MSC通过下调STAT3进而调节自噬通量来治疗PBC。(本文来源于《第十一届全国免疫学学术大会壁报交流集》期刊2016-11-04）
肝内胆管上皮论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:肝内胆管结石在西方国家少见,在中国却非常常见,因其病变复杂、复发率高而成为较难治愈的一种良性胆道疾病。胆管切开取石或胆道镜下取石、肝切除等治疗方法仅能尽力清除结石,却不能有效预防结石复发。结石复发患者不得不再次接受手术或内镜取石治疗,治疗风险及难度均增加,同时也增加了患者疾病痛苦。因此,研究结石形成机制,探索预防或干预结石形成的有效方法具有重要临床意义。绝大多数肝内胆管结石是以胆红素钙为主要成分的色素性结石。细菌产生的外源性β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase,β-GD)可催化结合胆红素分解成游离胆红素,促使游离胆红素与钙结合形成胆红素钙,沉积后形成胆色素结石。目前研究发现,胆道感染后,胆汁中除了外源性β-GD以外,内源性β-GD也明显增高,亦可促进结合胆红素分解为游离胆红素,进而参与胆色素结石形成。因此,内源性β-GD活性调节机制的研究将有助于我们探索干预肝内胆管结石形成或复发的有效措施。为了研究内源性β-GD调节机制,本课题拟明确LPS是否通过TLR4/NF-κB/c-myc信号偶联刺激人肝内胆管上皮细胞内源性β-葡萄糖醛酸酶表达进而促进肝内胆管结石形成以及找出在此过程中发挥关键作用的lncRNA并探索姜黄素是否通过调控该关键lncRNA而发挥对人肝内胆管上皮细胞内源性β-葡萄糖醛酸酶表达的调控作用。研究方法:首先对肝内胆管结石患者的肝脏组织切片和正常对照肝组织切片进行NF-κB/c-myc信号通路分子和β-葡萄糖醛酸酶的免疫组化染色分析和对LPS诱导人肝内胆管上皮细胞炎症损伤模型作β-葡萄糖醛酸酶和TLR4/NF-KB/c-myc信号通路分子的Western blot检测以验证肝内胆管结石形成是否与β-葡萄糖醛酸酶的高表达和TLR4/NF-κB/c-myc信号通路的活化相关。再利用其明生物基因雷达httβs://www.gcbi.com.cn/gcuser/html/auth/login?source=generadar 在线预测出与TLR4/NF-κB/c-myc炎症通路的叁个炎症分子都有相关性的lncRNA以找出与LPS刺激相关的重要lncRNA。对预测得到的lncRNA在蛋白质-RNA互作数据库(PRIDB)进行验证。接着,我们用荧光定量PCR的方法验证所预测的lncRNA在LPS诱导人肝内胆管上皮细胞炎症损伤模型中是否表达上调,而且同时检测所预测的lncRNA在肝内胆管结石患者的肝脏病变胆管组织和正常肝内胆管组织中的表达水平。确定LINC00311为候选的lncRNA之后,就利用siRNA转染的方式将胆管上皮细胞中的LINC00311敲低后再观测LPS所诱导的炎症反应是否减轻,再利用慢病毒感染方式使人肝内胆管上皮细胞稳定过表达LINC00311,Western blot检测观察过表达LINC00311胆管上皮细胞的TLR4、NF-κB、c-myc和β-葡萄糖醛酸酶的表达情况以及用CCK8实验检测稳定过表达细胞的增殖能力;同时还用Western blot检测过表达胆管上皮细胞的上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物α-SMA、vimentin的蛋白水平以明确是否发生上皮间质转化。然后,我们在LINC00311高表达的人肝内胆管上皮细胞加入NF-κB的抑制剂JSH-23(Selleck公司)以阻断NF-κB/c-myc信号通路后再用Western blot检测β-葡萄糖醛酸酶的表达情况以确定目的lncRNA促进胆管上皮细胞的炎症反应主要是通过NF-κB/c-myc信号通路来起作用的。最后,利用姜黄素抑制LPS刺激胆管上皮细胞所引起的炎症反应。我们用荧光定量PCR的方法检测LINC00311在对照组、LPS处理组和姜黄素与LPS同时处理组的胆管上皮细胞中的表达以探索姜黄素对目的lncRNA是否有抑制作用,并且用Western blot检测叁组细胞的TLR4、NF-κB、c-myc通路分子和β-葡萄糖醛酸酶的表达情况以探索姜黄素是否通过抑制上述炎症通路的活化来抑制β-葡萄糖醛酸酶的表达。结果:肝内胆管结石患者的肝脏组织中TLR4/NF-κB/c-myc信号通路呈活化状态且β-葡萄糖醛酸酶高表达,在LPS诱导人胆管上皮细胞炎症损伤模型中,也得到了同样的结果(P<0.05)。利用其明生物基因雷达功能预测到LINC00311和LINC00467这两个lncRNA与TLR4/NF-κB/c-myc信号通路的叁个分子都相关,接着对预测得到的lncRNA在蛋白质-RNA互作数据库(PRIDB)进行预测,反向预测得到LINC00311可以和NF-κB相互作用。在LPS诱导建立的人胆管上皮细胞炎症损伤模型中,用荧光定量PCR方法证实了 LINC00311与炎症反应相关(P<0.05),且在肝内胆管结石患者的肝组织中也得到了同样的结果(P<0.05)。接着,利用siRNA转染干扰胆管上皮细胞的LINC00311则抑制了 LPS所引起的炎症反应(P<0.05)。而后将LINC00311过表达的慢病毒感染胆管上皮细胞则可直接上调β-葡萄糖醛酸酶和激活TLR4/NF-κB/c-myc信号通路(P<0.05),还可促进上皮间质转化(P<0.05)。过表达LINC00311不能促进HIBEβiC细胞增殖(P>0.05)。当LINC00311过表达的胆管上皮细胞中的NF-κB/c-myc信号通路被阻断,则β-葡萄糖醛酸酶又被下调(P<0.05)。最后,将LPS刺激的人胆管上皮细胞同时用姜黄素处理,发现姜黄素可以抑制LPS所引起的LINC00311的高表达(P<0.05),因而抑制了内源性β-GD的表达和相应的TLR4/NF-κB/c-myc信号通路的活化(P<0.05)。结论:这些结果给我们揭示了与肝内胆管结石发生密切相关的长链非编码RNA-LINC00311并证实了 LINC00311能够能通过激活TLR4/NF-KB/c-myc信号通路上调β-葡萄糖醛酸酶的表达进而发挥促进肝内胆管结石形成的作用。这就提供了一种新型的生物标记物可作为肝内胆管结石的潜在的治疗靶点。中药姜黄素可以通过下调LINC00311,进而抑制TLR4/NF-κB/c-myc信号通路激活,导致β-葡萄糖醛酸酶表达下降,发挥抑制肝内胆管结石形成的作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肝内胆管上皮论文参考文献
[1].朱赟,姚根宏,唐小军.间充质干细胞移植干预2-OA/BSA诱导的原发性胆汁性胆管炎小鼠肝内胆管上皮细胞自噬蛋白表达的变化[J].实用肝脏病杂志.2019
[2].姚晨辉.LINC00311在LPS诱导人肝内胆管上皮细胞激活TLR4/NF-κB/c-myc信号通路从而上调内源性β-葡萄糖醛酸酶表达过程中的作用[D].中国医科大学.2019
[3].刘东红,林峰,杨再兴,张振成,仲人前.原发性胆汁性胆管炎肝内胆管上皮细胞TLR4及上皮-间质转化相关标志物的表达[J].温州医科大学学报.2018
[4].黄清水.IL-17A诱导PBC肝内胆管上皮细胞EMT及其机制探讨[D].南方医科大学.2018
[5].唐世芳.TLR4在脂多糖诱导大鼠肝内胆管上皮细胞EMT中的作用研究[D].遵义医学院.2018
[6].刘梦奇.缺血再灌注对人肝内胆管上皮细胞上皮间质转变的影响及其机制[D].郑州大学.2018
[7].邓世康,陈晓波,金焰.5-氟尿嘧啶抑制TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞间质化[J].基础医学与临床.2017
[8].朱明远,余宏铸.脂多糖对人肝内胆管上皮细胞IL-6/STAT3信号通路的影响[J].安徽医科大学学报.2017
[9].朱明远.脂多糖对人肝内胆管上皮细胞IL-6/STAT3信号通路的影响及意义[D].安徽医科大学.2017
[10].王倩.MSC下调STAT3调节肝内胆管上皮细胞自噬通量治疗原发性胆汁性肝硬化[C].第十一届全国免疫学学术大会壁报交流集.2016