核桃楸仁可溶性多糖提取纯化及结构特征初步分析

论文摘要

本文通过对核桃楸仁可溶性多糖的提取、纯化、分离及结构特征的一系列试验研究得出以下结论:1、对核桃楸仁可溶性多糖进行了热水提取、纤维素酶法提取和微波预处理提取的试验研究。经正交试验得出热水浸提时的最佳工艺条件为:料水比1:35,浸提温度100℃,浸提时间2.5h,多糖的一次提取得率为6.134%;得出纤维素酶法提取的最佳工艺条件为:提取温度60℃,pH值4.5,提取时间2h,加酶量1.0%,在此条件下多糖的一次提取得率为6.781%。微波预处理单因素试验表明,采用微波预处理15min可使多糖一次提取得率提高到6.791%。微波处理促进了大分子量的多糖组分的溶出提高多糖得率,使所提多糖的平均分子量增大。此外实验确定出热水浸提次数以2次较合理,累计提取得率可达6.778%;醇沉工艺条件为以多糖溶液4倍体积的无水乙醇沉淀7h。2、在核桃楸仁可溶性多糖粗粉的纯化试验中,系统地进行了Sevag法、酶法结合Sevag法除蛋白工艺条件的研究。根据试验结果,经综合考虑,先用木瓜蛋白酶以0.2%的加酶量,在pH6.0,温度65℃条件下,进行酶解4h,然后以氯仿-正丁醇4:1,Sevag试剂与多糖溶液体积比为1:2的条件进行一次Sevag法除蛋白,蛋白质去除率达到85.75%,多糖的损失率仅为15.97%。分步醇沉试验中,分别在乙醇浓度为30%、50%和80%得到3个多糖组分,其分子量分别为:（?）N（数均分子量）为22743、28492和39645;（?）W（重均分子量）为25644、37763和48630;（?）Z（Z均分子量）为67157、65203和72464。另外,对除蛋白后的多糖精粉进行了DEAE-52纤维素离子交换柱层析分离,得到蒸馏水洗脱组分PW和0.1mol/LNaCl洗脱组分PS两个主要的多糖组分,经凝胶HPLC标准分子量对照分析,多糖组分PW的（?）N为17735、（?）w为44787、（?）Z为17087,多糖组分PS的（?）N为28259、（?）w为51635、（?）Z为39547;两组分的相对含量比例为25%和75%。3、单组分多糖PW为乳白色粉末状固体,PS为浅褐色粉末状固体,可溶于水,不溶于乙醇、乙醚、丙酮等有机溶剂。多糖组分PW与PS分别经2.0mol/L H2SO4完全水解后HPLC分析单糖组成,确定PW由单一葡萄糖组成;PS由葡萄糖和鼠李糖组成。红外光谱（IR）分析,推断多糖组分PS为a-D-葡萄吡喃糖;多糖组分PW为具有羟基呋喃糖环结构的多糖。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 引言
• 1.1.1 核桃楸的价值及其利用
• 1.1.2 核桃楸仁的价值及其利用
• 1.1.3 核桃楸的利用与开发前景
• 1.1.4 多糖及其研究概况
• 1.1.5 本课题研究的目的与意义
• 2 核桃楸仁可溶性多糖的提取研究
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料与设备
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 主要实验设备
• 2.2.3 化学试剂
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 热水提取法
• 2.3.2 纤维素酶法提取
• 2.3.3 可溶性多糖的测定
• 2.3.4 微波预处理实验
• 2.3.5 提取次数实验
• 2.3.6 醇沉条件单因素实验
• 2.3.7 所得粗多糖的分析
• 2.4 结果与分析
• 2.4.1 标准曲线的绘制
• 2.4.2 热水提取条件的确定
• 2.4.3 酶法提取条件的确定
• 2.4.4 热水提取与酶法提取条件的比较
• 2.4.5 微波预处理的研究
• 2.4.6 提取次数的确定
• 2.4.7 醇沉工艺的确定
• 2.4.8 所得多糖粗粉的分析
• 3 核桃楸种仁可溶性多糖的纯化
• 3.1 引言
• 3.2 材料与设备
• 3.2.1 原料
• 3.2.2 试剂
• 3.2.3 仪器设备
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 蛋白质浓度测定:
• 3.3.2 多糖的测定方法
• 3.3.3 Sevag法除蛋白
• 3.3.4 酶法结合Sevag法除蛋白
• 3.3.5 分步醇沉
• 3.3.6 DEAE-52离子交换柱层析纯化分离
• 3.3.7 透析
• 3.3.8 凝胶HPLC分析
• 3.3.9 多糖精粉理化性质的分析
• 3.4 结果与讨论
• 3.4.1 Sevag法除蛋白的研究
• 3.4.2 酶法结合Sevag法除蛋白的研究
• 3.4.3 酶法结合Sevag法除蛋白与Sevag法除蛋白的比较
• 3.4.4 分步醇沉结果与分析
• 3.4.5 DEAE—52离子交换柱分离纯化结果
• 3.4.6 多糖精粉的理化性质
• 3.5 本章小结
• 4 核桃楸仁可溶性多糖结构特征初步分析
• 4.1 前言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 原料、试剂及仪器
• 4.2.2 实验方法
• 4.3 结果讨论
• 4.3.1 多糖组分PW与PS的分子量分析
• 4.3.2 多糖组分PW与PS的组成单糖测定
• 4.3.3 多糖组分PS与PW的红外图谱分析
• 4.4 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢