论文摘要
目的:建立大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞2,5—己二酮（2,5-HD）中毒模型,研究神经生长因子（Nerve Growth Factor,NGF）和神经节苷脂GM1（Ganglioside GM1）对2,5-HD中毒的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将细胞随机分为对照组和实验组,对照组于正常培养基生长,实验组以不同浓度2,5-HD、NGF和GM1及50μmol/L PI3-K抑制剂LY294002处理。采用Giemsa染色法在倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,流式细胞计数法检测细胞凋亡率,免疫印迹检测Akt和磷酸化-Akt（P-Akt）蛋白的表达。结果:随着2,5-HD处理浓度升高和时间延长,细胞损伤加重,存活率降低（P<0.05）,凋亡率上升（P<0.05）;以NGF和GM1预处理的细胞显示出明显的抗损伤性,细胞存活率提高（P<0.05）,凋亡率下降（P<0.001）,且在联合时较单独应用效果更显著（P<0.001）;NGF呈良好的剂量依赖性保护PC12细胞（P<0.001）,而GM1无论单独使用还是联合使用,均以50μmol/L作用最佳。免疫印迹显示,NGF和GM1都可呈剂量依赖性促进磷酸化Akt表达,联合使用时效果尤为明显,而对Akt水平无明显影响;以PI3-K抑制剂LY294002预处理阻断PI3-K信号后,NGF和GM1诱导的Akt磷酸化几乎完全被阻断。结论:2,5-HD呈剂量和时间依赖性抑制PC12细胞存活和增殖,诱导细损伤和凋亡。NGF和GM1对2,5-HD中毒性PC12细胞显示出协同保护作用。这种保护作用可能是通过启动PI3-K信号通路,激活Akt及其下游信号而产生的。
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