左归丸对D-半乳糖致亚急性衰老大鼠抗氧化能力影响的实验研究

论文摘要

目的：本研究旨在通过观察左归丸对D-半乳糖致亚急性衰老大鼠抗氧化能力的影响，从实验的角度探讨抗衰老古方左归丸的延缓衰老作用及其作用机制。方法：采用D-半乳糖致亚急性衰老法复制衰老大鼠模型，以六味地黄丸为对照药，通过对大鼠一般状态和脑组织海马区超微形态学改变方面的观察以及对防御性抗氧化酶（T-AOC、CAT、GSH-PX、SOD）、自由基浓度（H2O2、抑制超氧阴离子自由基和羟自由基能力）、脂质过氧化产物（MDA）、ATP酶、P16、Bcl-2、Bax和Caspase-3等指标的检测，验证左归丸低、中、高剂量对D-半乳糖致亚急性衰老大鼠抗氧化能力的调节作用，探讨其延缓衰老的作用机制。结果：D-半乳糖致亚急性衰老大鼠出现一般状态较差、活性氧自由基和脂质过氧化产物增加、抗氧化能力明显下降、细胞膜离子转运能力降低、P16过度表达、细胞凋亡增加、海马神经元细胞超微结构损伤以及神经元细胞内脂褐素沉积的病理表现。给予左归丸后，各剂量组大鼠一般状态有所改善，血清T-AOC、肝组织CAT和GSH-PX以及肝、脑组织SOD活力表现出不同程度的升高，肝、脑组织MDA和血清、肝组织H2O2含量表现出不同程度的降低，并且血清抑制超氧阴离子自由基和羟自由基的能力亦表现出不同程度的增强；同时肝、脑细胞膜Na+-K+-ATPase及Ca2+-Mg2+-ATPase活性表现出不同程度提高，肝组织和脑海马区Bcl-2蛋白表达上调而P16、Bax和Caspase-3蛋白表达下调，脑组织海马CA1区神经元细胞超微结构的损伤程度减轻且脂褐素沉积减少。结论：左归丸对D-半乳糖致亚急性衰老模型大鼠能起到改善老化状态、提高抗氧化能力、降低活性氧自由基的含量、减少自由基对细胞膜的损伤、增强细胞膜离子转运能力、下调P16的表达、抑制细胞凋亡、维持细胞正常形态及其各项功能正常发挥的作用，提示左归丸具有延缓衰老的作用。左归丸延缓衰老的机理可能与上述作用机制相关，但由于活性氧自由基的攻击可以导致细胞结构和功能损伤、细胞膜稳定性降低、细胞凋亡发生和脂褐素沉积增加，故本方抗衰老的作用机理可能主要与提高机体抗氧化能力及降低活性氧自由基造成的损伤有关。左归丸全方纯补无泻，峻补真阴，体现了中医补肾填精的治法，本实验结果提示补肾填精法可延缓衰老。左归丸三个剂量组对各项指标的改善作用不尽相同，但总体上衡量左归丸中、高剂量组疗效更为全面和稳定，左归丸低剂量组疗效相对不稳定，提示左归丸的抗衰老作用可能在一定范围内呈现剂量升高疗效增强的关系。

论文目录

• 缩略语表
• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 文献综述
• 一.中医学对衰老的认识和中医药抗衰老的研究进展
• （一） 中医学对衰老的认识与阐释
• 1.肾气衰、天癸竭是衰老发生的根本机制
• 2.阴虚亦是衰老发生的主要病机
• 3.五脏皆衰是衰老最终的整体特征
• 4.先天禀赋和后天环境皆可影响衰老的发生
• （二） 衰老发生机制的研究与进展
• 1.主虚说
• 2.主本虚标实说
• 3.其它衰老学说
• （三） 补益药与抗衰老
• 1.古人延年,以补为先
• 2.今人抗衰,亦重补益
• 二.现代医学对衰老的认识和抗衰老的研究动态
• （一） 现代医学对衰老的认识
• 1.衰老的定义
• 2.衰老的发生机制
• （二） 抗衰老药物的研究概况
• 1.抗氧化剂
• 2.激素
• 3.增强脑功能药
• （三） 衰老动物模型的研究概况
• 1.自然衰老动物模型
• 2.根据衰老发生机制学说建立的衰老模型
• 3.快速老化衰老模型
• 4.其它衰老模型
• 三.左归丸的研究进展
• （一） 左归丸临床研究概况
• 1.肾藏精,阴虚精亏则它脏失养
• 2.肾主生殖,阴虚精亏则生殖功能异常
• 3.肾主骨,阴虚精亏则筋骨失养
• 4.肾生髓,阴虚精亏则髓海失充
• 5.其它
• （二） 左归丸实验研究概况
• 1.防治骨质疏松症的研究
• 2.补肝肾作用机理的研究
• 3.影响生殖内分泌、免疫功能的研究
• 4.延缓衰老及对中枢神经系统影响的研究
• 5.其它
• （三） 左归丸研究进展小结
• 实验研究
• 一.实验材料
• （一） 实验动物
• （二） 实验用药及制备
• （三） 实验主要试剂及仪器设备
• 1.主要试剂
• 2.主要仪器设备
• 二.实验方法
• （一） 动物分组
• （二） 造模及给药方法
• 1.造模方法
• 2.给药方法
• （三） 观察指标及方法
• 1.大鼠一般状态的观察
• 2.防御性抗氧化酶类活性测定
• 3.脂质过氧化产物及自由基浓度测定
• 4.细胞膜离子转运能力的测定
• 5.对大鼠脑、肝组织的蛋白表达的测定
• 6.对大鼠脑组织海马区超微结构的观察
• （四） 统计方法
• 三.实验结果
• （一） 左归丸对D-半乳糖致衰老大鼠一般状态的影响
• （二） 左归丸对D-半乳糖致衰老大鼠防御性抗氧化酶类的影响
• 1.对总抗氧化能力（T-AOC）的影响
• 2.对过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）含量的影响
• 3.对肝、脑组织超氧化物歧化酶（SOD）活力的影响
• 4.左归丸对D-半乳糖致衰老大鼠防御性抗氧化酶类活性影响实验小结
• （三） 左归丸对D-半乳糖（D-gal）致衰老大鼠脂质过氧化产物及自由基浓度的影响
• 1.对肝、脑组织丙二醛（MDA）含量的影响
• 2O₂）含量的影响'>2.对肝组织、血清过氧化氢（H₂O₂）含量的影响
• 3.对抑制超氧阴离子自由基能力的影响
• 4.对抑制羟自由基能力的影响
• 5.对脂质过氧化产物及自由基浓度的影响实验小结
• +-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性的影响'>（四） 左归丸对D-半乳糖致衰老大鼠肝、脑细胞膜Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性的影响
• 1.对肝细胞膜ATP酶活性的影响
• 2.对脑细胞膜ATP酶活性的影响
• 3.对肝、脑细胞膜ATP酶活性的影响实验小结
• （五） 左归丸对D-半乳糖致衰老大鼠肝、脑组织蛋白表达的影响
• 1.对肝组织和脑海马区P16表达的影响
• 2.对肝组织和脑海马区Bcl-2表达的影响
• 3.对肝组织和脑海马区Bax表达的影响
• 4.对肝组织和脑海马区Caspase-3表达的影响
• 5.对脑、肝组织蛋白表达影响实验小结
• （六） 左归丸对D-半乳糖致衰老大鼠脑组织超微结构的影响
• 讨论
• 一.左归丸方析
• （一） 左归丸立方之意
• （二） 左归丸组方原理
• 二.补肾填精与抗老防衰
• （一） 肾精与衰老
• （二） 补肾填精与抗衰老
• 三.对D-gal致亚急性衰老模型的评价
• （一） D-gal致衰机理
• （二） D-gal致亚急性衰老模型的病理生理机制
• 四.左归丸延缓衰老的作用及机理研究
• （一） 左归丸对D-半乳糖致衰老大鼠抗氧化能力的影响
• 1.对D-gal致衰老大鼠T-AOC、CAT和GSH-PX含量的影响
• 2.对D-gal致衰老大鼠SOD活力、MDA含量的影响
• 2O₂含量、抑制超氧阴离子自由基和羟自由基能力的影响'>3.对D-gal致衰老大鼠H₂O₂含量、抑制超氧阴离子自由基和羟自由基能力的影响
• （二） 左归丸对D-半乳糖致衰老大鼠肝、脑细胞膜ATP酶活性的影响
• （三） 左归丸对D-半乳糖致衰老大鼠肝、脑组织P16、 Bcl-2、 Bax和Caspase-3表达的影响
• 1.左归丸对D-gal致衰老大鼠P16表达的影响
• 2.左归丸对D-gal致衰老大鼠Bcl-2、 Bax和Caspase-3表达的影响
• 3.自由基与细胞凋亡
• （四） 左归丸对D-半乳糖致衰老大鼠脑组织超微结构的影响
• 1.线粒体与衰老
• 2.脂褐素与衰老
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 个人简历