TAⅡ小鼠自发乳腺癌肿瘤相关差异蛋白研究

论文摘要

目的：研究TAⅡ自发乳腺癌小鼠、正常TAⅡ小鼠血清蛋白质组表达图谱的差异，利用基质辅助激光解吸／电离飞行时间串联质谱（MALDI-TOF-TOFMS）技术和生物信息学方法寻找TAⅡ小鼠自发性乳腺癌发生相关的差异蛋白，初步探讨TAⅡ小鼠自发乳腺癌发生的分子机制。方法：1收集2005年3月～2006年10月的59只TAⅡ自发乳腺癌小鼠，均为雌性，断颈处死后，75％酒精消毒皮肤，剥离肿物，福尔马林固定，石蜡包埋，切片，HE染色后镜检。2 5只TAⅡ自发乳腺癌小鼠和5只正常TAⅡ小鼠内眦取血，5000rps／min，离心10min后收集血清，将血清标本进行双向电泳，以固相pH梯度等电聚焦PH3-10为第一向和垂直十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向，经考马斯亮蓝染色和PDQuest软件分析进行数字化匹配并结合人工比对，不同胶匹配点相对含量的比值大于3者认为存在差异，确认差异蛋白点。3对双向电泳确认为有差异的蛋白点通过MALDI-TOF-TOFMS对蛋白进行鉴定，获得肽质量指纹图谱经过质荷比软件分析后用Mascot蛋白质数据库检索，并对鉴定出的各个蛋白质进行功能分析，阐述其在TAⅡ小鼠自发性乳腺癌发生过程中的相关分子机制。结果：1 59只TAⅡ自发乳腺癌小鼠的发瘤时间为330±95d，生产次数为2.7±1.8次，肿物的好发部位依次为左下腹，左前胸，右前胸，右下腹及颈背部。有12只小鼠的肿物是多发的，其余均为单发，病理证实均为腺癌。2双向电泳结果显示，TAⅡ自发乳腺癌小鼠和正常TAⅡ小鼠血清的双向电泳图谱清晰、分辨率较高，共找到11个差异蛋白质点，这11个差异蛋白质点均在TAⅡ自发乳腺癌小鼠中高表达，在正常TAⅡ小鼠中表达减少或缺失。3对经双向电泳分离出的11个差异蛋白点进行MALDI-TOF-TOFMS检测，共得到11张肽质量指纹图谱（PMF），经Mascot蛋白质数据库检索确定了五种蛋白质，分别为：妊娠区带蛋白、对氧磷酶、HemK家族修饰性甲基化酶、结合珠蛋白和血清淀粉样P成分。其中这5种蛋白在TAⅡ自发乳腺癌小鼠高表达，而在正常TAⅡ小鼠呈低表达或表达缺失。结论：1正常TAⅡ小鼠经过长期的连续传代后，目前其自发乳腺癌的相关病理学特征与以往报道有所差异，遗传基因型和表型发生变化，自发性乳腺癌的发生更加趋于稳定。2通过双向电泳结合MALDI-TOF-TOFMS技术在正常TAⅡ小鼠与TAⅡ自发乳腺癌小鼠间共鉴定出5种血清差异蛋白，经文献检索与肿瘤的发生有一定关系。在TAⅡ自发乳腺癌小鼠中妊娠区带蛋白高表达，可能由于自发瘤小鼠免疫功能低下，有利于肿瘤细胞逃避机体的免疫监视，促进肿瘤的发生发展。自发瘤小鼠血清中高表达的对氧磷酶，可能通过影响致癌物的代谢而促进乳腺癌的发生。自发瘤小鼠HemK家族修饰性甲基化酶高表达，说明蛋白甲基化的异常与TAⅡ小鼠自发乳腺癌有一定关系；血清结合珠蛋白和淀粉样P成分的升高可能是由于肿瘤诱发了体内的急性期反应，从而促进了这些急性期蛋白质的表达。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略语
• 前言
• TAⅡ小鼠自发乳腺癌病理相关特征分析
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• TAⅡ小鼠自发乳腺癌双向电泳质谱分析研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 在研期间发表文章
• 致谢