血浆尿嘧啶核苷测定方法的建立及胞磷胆碱钠片生物等效性研究

论文摘要

目的：1.建立测定人血浆中尿嘧啶核苷浓度的高效液相色谱法；2.进行试验制剂胞磷胆碱钠肠溶片与市售参比制剂胞磷胆碱钠胶囊的单剂口服双交叉两周期人体生物等效性试验,评价两制剂的生物等效性,为新药报批及其临床应用提供试验依据。方法：1.色谱条件：色谱柱为Phenomenex kinetex C18 （100×4.6 mm,2.6μm）;流动相：0.05 M磷酸盐缓冲液（1000 mL水中加入磷酸二氢钾6.8044 g,用磷酸调至pH 3.5）：甲醇（98：2）；流速：0.8 mL·min-1；柱温：30℃；检测波长：260m；进样量：20μL。选用阿莫西林作为内标。2.胞磷胆碱钠片在健康志愿者体内的生物等效性研究,24名健康男性志愿者按体重排序后随机分为两组,于试验前一天晚10时后禁食,试验当日晨抽取空白血样后,立即空腹口服试验制剂（胞磷胆碱钠肠溶片）或参比制剂（胞磷胆碱钠胶囊）600 mg,于给药前和给药后0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12.0 h取肘静脉血4 mL,立即移入肝素抗凝管中,静置,4℃5000 rpm低温离心5 min,取血浆分双份于-20℃贮存备测。一周后交叉重复上述试验。3.采用高效液相色谱（HPLC）法测定胞磷胆碱钠代谢产物尿嘧啶核苷经时血浓度。尿嘧啶核苷血浓度-时间数据经《DAS 2.0》实用药代动力学计算程序处理,得试验制剂和参比制剂胞磷胆碱钠代谢产物尿嘧啶核苷药代动力学参数；根据试验制剂和参比制剂AUCo-t计算试验制剂的相对生物利用度。同时对主要药代动力学参数进行方差分析、双单侧t检验和（1-2α）置信区间分析,评价试验制剂和参比制剂的生物等效性。结果：1.血浆中尿嘧啶核苷的最低检测限低于50 ng·mL-1,该方法在0.05-2μg/mL范围内线性关系良好,标准曲线方程为Y=2.10X+0.57（r=0.9928,n=7）,低、中、高浓度（0.1 gg·mL-1,0.5μg·mL-1和1.6μg·mL-1）尿嘧啶核苷和内标（10μg·mL-1）的提取回收率分别为99.66%、102.09%、95.57%和81.52%；低、中、高浓度尿嘧啶核苷血浆样品的日内、日间变异（RSD）均小于15%,血浆样品室温放置8 h,长期冷冻7天、14天,反复冻融2次稳定性良好。2.单剂量口服胞磷胆碱钠实验制剂和参比制剂后,血浆尿嘧啶核苷的Cmax分别为（1.956±0.402）μg·mL-1和（2.070±0.619）μg·mL-1,t1/2分别为（4.393±2.526）h和（4.857±4.503）h,Tmax分别为（3.354±1.118）h和（3.688±1.082）h,AUCo-t分别为（12.774±3.222）μg·mL-1·h和（13.992±3.953）μg·mL-1·h,AUC0-∞分别为（16.015±5.647）μg·mL-1·h和（17.198±6.672）μg·mL-1·h。结论：1.建立的测定人血浆中尿嘧啶核苷浓度的高效液相色谱法专属性强,灵敏度高,操作简便快速,测定结果可靠,可用于胞磷胆碱钠口服制剂的生物等效性研究。2.胞磷胆碱钠肠溶片单剂口服给药后尿嘧啶核苷人体相对生物利用度为92.7%±17.3%,两制剂生物等效。3.整个试验过程顺利,志愿者依从性良好,未见严重不良反应发生。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语说明
• 前言
• 第一部分 HPLC测定健康志愿者血浆中尿嘧啶核苷浓度的方法学研究
• 1 材料与方法
• 1.1 仪器
• 1.2 药品和试剂
• 1.3 色谱条件
• 1.4 标准溶液配制
• 1.5 血浆样品处理
• 2 方法学评价
• 2.1 方法专属性
• 2.2 绝对回收率
• 2.3 标准曲线与线性范围
• 2.4 最低定量限
• 2.5 精密度与准确度
• 2.6 稳定性试验
• 2.7 质控试验
• 3 讨论
• 第二部分 胞磷胆碱钠片人体生物等效性研究
• 1 药品
• 2 实验方法
• 2.1 志愿者选择
• 2.2 给药及血样采集
• 2.3 高效液相色谱法测定血浆中尿嘧啶核苷浓度
• 2.4 数据处理
• 3 结果
• 3.1 24名志愿者尿嘧啶核苷血浓度-时间数据
• 3.2 24名志愿者主要药代动力学参数
• 3.3 24名志愿者尿嘧啶核苷血浓度—时间曲线
• 3.4 生物等效性评价
• 3.5 安全性
• 4 讨论
• 全文结论
• 1 HPLC测定健康志愿者血浆中尿嘧啶核苷浓度的方法学研究
• 2 胞磷胆碱钠片人体生物等效性研究
• 3 安全性评价
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 附录
• 学位论文评阅及答辩情况表