紫丁香蘑液体发酵海藻糖的提取纯化及应用研究

论文摘要

紫丁香蘑（Lepista nuda）为伞菌目,白蘑科,香蘑属的一种药食皆用的野生真菌。目前,对紫丁香蘑的林地栽培获得子实体的试验进行了研究,而对紫丁香蘑的液体发酵及有效成分的提取研究的比较少。食药用菌中占70%以上的游离糖和游离糖醇是由一二种糖和糖醇组成的,紫丁香蘑中主要以海藻糖为主,含量较高。海藻糖可应用于食品、医药、化妆品等多方面的研究。我国食用菌资源丰富,借助食用菌开发海藻糖具有独特的优越性。本文对液体发酵紫丁香蘑海藻糖的提取、纯化、鉴定以及应用进行研究。本研究主要试验结果如下:1.以菌丝体干重和海藻糖的含量为测定指标,确定紫丁香蘑液体发酵培养基的组成。试验得出,最适氮源为酵母膏,碳源为葡萄糖,最初pH值为7.0。2.紫丁香蘑菌丝体最佳提取工艺参数研究。通过对紫丁香蘑菌丝体进行单因素和3因素3水平的正交试验,研究提取时间、温度、乙醇浓度对紫丁香蘑菌丝体海藻糖提取的影响。影响提取的各因素顺序:温度>乙醇浓度>提取时间。最佳提取参数最优组合为A2B1C2,即提取时间为1h,温度为70℃,乙醇浓度30%。得到的海藻糖的含量为12.92%,蛋白含量0.62%。3.海藻糖的纯化。采用Sevag法除蛋白。Sevag法中海藻糖溶液与氯仿-正丁醇溶液的比例不同时,不但对蛋白去除率有影响,而且对海藻糖的损失程度也不同,综合考虑,最后确定除蛋白的最佳海藻糖溶液与氯仿及正丁醇的体积比为5:1:0.25。通过测定蛋白含量,从而选择了除蛋白的次数为二次,经二次除蛋白后的海藻糖溶液中的蛋白含量为0.3%。通过单因素和4因素3水平试验,对除蛋白后的海藻糖溶液进行活性炭脱色,活性炭脱色的最佳工艺为:调节pH值为4,加入3%的活性炭,60℃下搅拌10min,脱色率达到72.04%,海藻糖含量为8.06%。脱盐的最佳工艺条件为:1mL/min,pH值6,此时脱色率在90%以上,脱盐率在97%以上。4.薄层层析鉴定海藻糖。通过在不同的展开剂中Rf值的测定,确定展开剂为正丁醇:吡啶:水=15:3:2,点样量1.0ul,硫酸和甲醇配制成1:4的溶液,105℃的干燥箱中加热使之显色。结晶海藻糖得率为2.24%,海藻糖含量92.56%。5.海藻糖应用的研究表明,海藻糖具有一定的抗冷冻和抗疲劳作用。在抗冷冻方面,通过观察不同时间鱼糜色泽、气味、水质三个因素的变化。在抗疲劳方面,海藻糖对小鼠游泳试验、爬绳试验、肝糖原、血清尿素氮都有显著影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 紫丁香蘑的简介
• 1.1.1 紫丁香蘑分类地位及其在自然界的分布
• 1.1.2 紫丁香蘑的药用价值
• 1.1.3 紫丁香蘑的研究进展
• 1.2 海藻糖的概况
• 1.2.1 海藻糖的理化性质及其存在
• 1.2.2 海藻糖的生物活性
• 1.2.3 海藻糖的生产与制备
• 1.2.4 海藻糖的保护作用
• 1.2.5 海藻糖的应用
• 1.3 选题目的及意义
• 2 材料与方法
• 2.1 材料与试剂
• 2.1.1 供试材料
• 2.1.2 主要试验试剂
• 2.2 主要试验仪器
• 2.3 试验方法
• 2.3.1 紫丁香蘑液体发酵培养基的优化
• 2.3.2 提取工艺研究
• 2.3.3 海藻糖的纯化
• 2.3.4 海藻糖的应用研究
• 3 结果与分析
• 3.1 紫丁香蘑液体发酵培养基的优化
• 3.1.1 碳源对紫丁香蘑液体发酵海藻糖的影响
• 3.1.2 氮源对紫丁香蘑液体发酵海藻糖的影响
• 3.1.3 培养基初始pH值的筛选试验
• 3.2 紫丁香蘑菌丝体海藻糖提取工艺研究
• 3.2.1 单因素条件对海藻糖提取的影响
• 3.2.2 正交试验结果与分析
• 3.2.3 子实体和菌丝体中的海藻糖及蛋白质含量的比较
• 3.3 蛋白质的去除
• 3.4 活性炭脱色试验结果与分析
• 3.4.1 单因素条件对脱色的影响
• 3.4.2 正交试验结果与分析
• 3.5 流速和pH值对离子交换脱色脱盐的影响
• 3.6 结晶海藻糖制品薄层分析
• 3.7 海藻糖应用初步研究
• 3.7.1 冷冻保护作用的初步研究
• 3.7.2 在抗疲劳方面的应用
• 4 讨论
• 4.1 液体发酵培养基的筛选
• 4.2 海藻糖提取与纯化方法的探讨
• 4.3 海藻糖的应用
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历