论文摘要
目的:热休克反应是机体对一系列损伤的一种快速的、短暂的、保守的细胞应激反应过程,可保护细胞免于进一步的毒性损害。它包括一些特殊基因片段的激活,并合成保护细胞的热休克蛋白(heat shock protein,HSP )。HSP是生物体在不良环境因素作用下所产生的一组具有高度保守性的应激蛋白。按分子量的大小, HSP分为5类,即HSP110、HSP90、HSP70、HSP40和sHSP。晶状体中AA2晶状体蛋白、AB2晶状体蛋白和HSP27属于sHSP家族。热休克、氧化应激、亚砷酸钠及高渗等均可诱导HSP70、HSP27的表达。为探讨HSP在糖尿病性白内障发生、发展中的作用,本课题在糖尿病性白内障动物模型建立的基础上,研究STZ性白内障的晶状体上皮细胞((lens epithelial cells,LECs)热休克预处理后HSP70的表达情况以及晶状体生化指标的变化和可溶性蛋白的含量变化情况。方法:将30只SD大鼠随机分为三组:A组为空白对照组:正常喂养不给予任何处理;B组为STZ组:正常喂养三天,腹腔注射STZ (55mg/kg),三天后测量血糖浓度﹥16.65mmol/L;C组为热处理STZ组:正常喂养三天,以10%水合氯醛麻醉后,置于45℃水浴箱中维持15min,常温下放置2小时,腹腔注射STZ (55mg/kg),隔日水浴一次,三天后测量血糖浓度﹥16.65mmol/L。每周用裂隙灯观察晶状体的变化,在实验六周后分别摘取眼球,取出晶状体。采用免疫组化技术检测HSP70在各组LECs中的表达;运用考马斯亮兰与呈色法测定各组可溶性蛋白的浓度;呈色法测OD值,检测各组丙一醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及非蛋白旒基(GSH)的含量。结果:1.裂隙灯检查每周A、B、C各组晶状体的混浊情况:B、C两组晶状体的混浊情况差异具有统计学意义,B组混浊程度明显高于C组。A、C两组差异不显著。2.采用免疫组化技术检测HSP70在各组LECs中的表达:C组HSP70的表达高于B组,差异具有统计学意义。B组HSP70的表达高于A组,差异同样具有统计学意义。3.运用考马斯亮兰与呈色法测定各组可溶性蛋白浓度:B组可溶性蛋白含量明显低于A、C两组,差异具有统计学意义,而A、C两组差异不显著。4.呈色法测OD值,A、B组晶状体MDA、SOD、GSH的含量均低于C组,差异具有统计学意义;A、B两组之间无差异。结论:预先的热处理提高HSP70的表达,并可能对高血糖环境中的晶状体上皮细胞具有保护作用。