他汀联合内皮祖细胞移植治疗周围血管病的基础研究

论文摘要

目的:观察辛伐他汀对人外周血内皮祖细胞（endothelialprogenitor cell,EPC）的影响。方法:采用密度梯度离心法从人外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被培养板,培养7天后,收集贴壁细胞,加入不同浓度辛伐他汀（分别为0.0001、0.001、0.01、0.1、1.0μmol/L）培养24小时。激光共聚焦显微镜鉴定FITC-LIEA-I和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPC,并在倒置荧光显微镜下计数。分别采用MIT比色法测定EPC的增殖能力、改良的Boyden小室测定EPC的迁移能力、黏附实验测定EPC的黏附能力、SA-β-Gal和DAPI双染测定衰老的EPC、流式细胞仪检测凋亡细胞。结果:辛伐他汀显著增加外周血EPC数量（P＜0.01）,明显改善外周血EPC的增殖能力、迁移能力和黏附能力（P＜0.01或P＜0.05）,0.01μmol/L辛伐他汀为最大增加EPC数量、促增殖、促迁移、促黏附效应。当加入P13K阻断剂Ly294002后,辛伐他汀改善EPC功能的上述作用被逆转。结果还显示,1.0μmol/L浓度辛伐他汀具有抗EPC衰老的作用（P＜0.01）。此外,在低浓度胎牛血清培养诱导的EPC凋亡实验中,辛伐他汀具有抗EPC凋亡的趋势。结论:辛伐他汀能够增加EPC的数量,改善EPC的增殖能力、迁移能力、黏附能力和抗衰老的作用。辛伐他汀促进EPC增殖、迁移、黏附作用涉及PI3K/Akt途径。目的:观察辛伐他汀联合内皮祖细胞（endothelial progenitor cell,EPC）移植对裸鼠（nude mice）缺血后肢血管新生的影响,并探讨其机理。方法:雌性裸鼠分为4组,每组10只。对照组:生理盐水喂饲+磷酸缓冲液（PBS）肌肉注射;辛伐他汀组:辛伐他汀喂饲+PBS肌肉注射;EPC组:生理盐水喂饲+EPC移植;联合治疗组:辛伐他汀喂饲+EPC移植。外周静脉血分离、培养获得EPC,血样取自健康成年男性志愿者。结扎裸鼠右侧后肢膝关节以上股动脉,包括表浅和深部的分支。后肢缺血模型制作成功后,在EPC组、联合治疗组立即将5×106EPC分5点注射到右下肢的缺血周边区域。辛伐他汀组、联合治疗组裸鼠喂饲辛伐他汀（20mg/kg/只）,每日一次,共21天。结果:在术后第10天,激光多普勒血流灌注图像指数（LDPI index）和对照组（0.46±0.05）比较,辛伐他汀组、EPC组、联合治疗组显著升高（0.59±0.06,0.68±0.07,0.81±0.07,P＜0.05或P＜0.01）;在第21天,和对照组（0.57±0.06）比较,辛伐他汀组、EPC组、联合治疗组的LDPIindex显示进一步的改善（0.74±0.07,0.80±0.07,0.91±0.06,P＜0.05或P＜0.01）,在4组中,联合治疗组LDPI index最高。毛细血管数目/肌纤维的比值在联合治疗组最高,其后依次为EPC组、辛伐他汀组和对照组（0.69±0.07,0.49±0.05,0.45±0.04 versus 0.26±0.03,P＜0.01）。TUNEL阳性细胞的比率,辛伐他汀组（25.62±2.62%）、EPC组（23.43±2.55%）、联合治疗组（14.43±1.42%）明显低于对照组（37.24±3.83%,P＜0.01）,联合治疗组的TUNEL阳性细胞的比率在4组中最低。和对照组比较,辛伐他汀组、EPC组、联合治疗组的Bax阳性细胞的比率显著降低（39.03±4.27%,35.51±3.60%,20.84±2.05%versus 65.14±6.47%,P＜0.01）;辛伐他汀组、EPC组、联合治疗组的Bcl-2阳性细胞的比率与对照组比较显著升高（34.70±3.52%,37.24±3.74%,68.16±6.25%versus 17.29±1.81%,P＜0.01）;在4组中,联合治疗组的Bax阳性细胞的比率最低,Bcl-2阳性细胞的比率最高。和对照组比较,治疗组磷酸化Akt和磷酸化Akt（p-Akt）/Akt的比值显著增加;在4组中,联合治疗组的p-Akt/Akt的比值最高。结论:辛伐他汀或内皮祖细胞移植单独应用均可促进血管新生;辛伐他汀联合内皮祖细胞移植则更显著地促进缺血后肢血管新生。辛伐他汀与内皮祖细胞移植的联合治疗不仅部分通过下调Bax和上调Bcl-2抑制缺血骨骼肌细胞的凋亡,而且显著活化Akt磷酸化。联合治疗的这些影响可能来源于辛伐他汀介导的血管新生、移植的EPC介导的血管新生,同时也来源于辛伐他汀改善移植EPC功能的有益作用。

论文目录

• 第一部分 辛伐他汀对外周血内皮祖细胞数量和功能的影响
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 分析与讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分 辛伐他汀联合内皮祖细胞移植促进缺血后肢血管新生及抗凋亡的研究
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 分析与讨论
• 小结
• 参考文献
• 致谢
• 综述及参考文献
• SCI论文
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