人参锈腐菌颉颃放线菌发酵条件及抗生素分离提取

论文摘要

本文主要针对人参锈病菌，对本实验室现有的七个放线菌株进行筛选，选出一株抑菌效果较好的菌株1A，然后从抑菌活性测定、发酵条件优化、活性组分提取、粗品理化性质及活性成分官能团的分析进行了研究，结果如下：通过平板对峙培养法和抑菌圈法，对7个放线菌菌株进行了初筛和复筛，结果表明有6个菌株对人参锈腐菌具有颉颃作用，其中菌株1A的抑菌活性最好。菌株1A的发酵液对人参锈腐菌（Cylindrocarpon destructans）、禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）、稻瘟病菌（Pyricularia grisea）、玉米弯孢菌（Curvularia lunata）、玉米大斑病菌（Exerohilum turcicum）、烟草赤星病菌（Alternaria alternata）、黄瓜黑星病菌（Cladosporium cucumermum）、蕃茄炭疽病菌（Colletotrichum coccldes）、禾草离蠕孢菌（Bipolaris sorokiniana）均有较好的抑制作用。比较了7种发酵培养基对菌株1A产素的影响，初步确定适合的培养基G；对菌株1A发酵条件的进行了研究，结果表明玉米粉和葡萄糖、大豆粉和酵母粉复合使用是菌株lA发酵的最佳碳源和氮源；加入无机盐，可以促进菌株1A产素。通过正交试验明确了最优的发酵培养基配方为玉米粉3（％），葡萄糖1（％），大豆粉2（％），酵母粉0．3（％），KH2PO40．1（％），CaCO30．3（％），NaCl 0．1（％），最佳培养条件为种龄28h、接种量6％、装液量为30mL／250mL三角瓶，发酵周期60h、摇床转速200rpm、发酵温度28℃、pH 7。对菌株1A发酵液的预处理方法--酸处理法和有机溶剂处理法进行了比较，结果表明，有机溶剂处理法不仅沉淀较为完全，而且有效成分的活性丧失比率小，因此将有机溶剂沉淀法做为本试验的预处理方法。采用溶媒萃取法，收集其有机相，通过减压浓缩，除去有机溶剂，得到黄色的粗品（暂定名为TS08）。比较粗品氯仿饱和溶液与原发酵液抑菌活性，结果表明，粗品活性受外界条件影响较小。TS08对紫外、高温、低温都具有很好的稳定性，层析试验结果表明TS08中的活性成分为中性物质，水溶性强，并且极性较大。利用显色反应判断该活性成分中可能含有不饱和键。采用特征性官能团反证法，研究结果表明该活性成分不是氨基酸、多肽或蛋白质，可能是糖或糖苷。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 文献综述
• 1.1 关于人参锈腐病
• 1.1.1 农业防治
• 1.1.2 生物防治
• 1.2 抗生素产生的背景
• 1.3 农用抗生素发展历程
• 1.4 我国农用抗生素的发展状况
• 1.5 农用抗生素的作用机制
• 1.5.1 作用于细胞壁
• 1.5.2 作用于细胞膜
• 1.5.3 作用于蛋白质合成系统
• 1.5.4 作用于能量代谢系统
• 1.5.5 抑制核酸合成
• 1.5.6 通过提高植物的抗病力而防治病害
• 1.6 农用抗生素研究开发的意义
• 1.7 抗生素研究现状
• 1.7.1 菌种方面
• 1.7.2 发酵
• 1.7.3 提炼即分离纯化工艺
• 第二章 抗生素高产菌株筛选
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 菌株来源
• 2.1.2 供试病原菌
• 2.1.3 供试培养基
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 菌株单孢分离
• 2.2.2 菌株的抑菌活性测定
• 2.3 试验结果
• 2.3.1 高产菌株的选育
• 2.3.2 菌株的抑菌活性测定
• 第三章菌株1A发酵条件研究
• 3.1 试验材料
• 3.1.1 供试菌株
• 3.1.2 供试病原菌
• 3.1.3 供试培养基
• 3.1.4 主要供试器材
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 不同发酵液对1A产素的影响
• 3.2.2 不同碳源对菌株1A产素的影响
• 3.2.3 不同氮源对菌株1A产素的影响
• 3.2.4 营养条件单因子试验
• 3.2.5 碳氮源正交试验
• 3.2.6 无机盐正交试验
• 3.2.7 发酵条件研究
• 3.2.8 原始发酵培养基配方与最优培养基配方的比较试验
• 3.3 试验结果
• 3.3.1 不同发酵液对菌株1A产素的影响
• 3.3.2 不同碳源对菌株1A产素的影响
• 3.3.3 不同氮源对菌株1A产素的影响
• 3.3.4 营养条件单因子试验
• 3.3.5 碳氮源正交设计试验
• 3.3.6 无机盐正交设计试验
• 3.3.7 原始发酵培养基配方与最优培养基配方的比较试验
• 3.4 发酵条件研究
• 3.4.1 摇瓶装量实验
• 3.4.2 种龄试验
• 3.4.3 接种量试验
• 3.4.4 发酵温度试验
• 3.4.5 初始pH试验
• 3.4.6 发酵时间试验
• 3.4.7 摇床转速试验
• 3.4.8 发酵正交试验
• 第四章 菌株1A所产抗生素分离提取及结构初探
• 4.1 供试材料
• 4.1.1 供试菌株和供试病原菌
• 4.1.2 主要仪器及主要试剂
• 4.1.3 供试培养基
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 菌株1A所产抗生素的粗提
• 4.2.2 粗品TS08的特性初探
• 4.3 试验结果
• 4.3.1 菌株1A所产抗生素的粗提
• 4.3.2 抗生素TS08的特性初探
• 第五章 结论与讨论
• 5.1结论
• 5.1.1 高产菌株选育及对其它病原菌抑菌活性测定
• 5.1.2 菌株1A摇瓶发酵条件初探
• 5.1.3 粗品性质初探
• 5.1.4 纸层析、硅胶薄层层析
• 5.2 讨论
• 5.2.1 高产菌株筛选
• 5.2.2 菌株1A发酵条件研究
• 5.2.3 菌株1A所产抗生素的提取
• 5.2.4 粗品TS08特性初探
• 5.2.5 菌株1A菌发酵产特征官能团反应
• 5.2.6 菌株1A发酵产物的田间防治效果
• 参考文献
• 致谢
• 作者简历