TGF-β1抗体对肝星状细胞Ⅰ型胶原及TIMP-1基因表达的影响

论文摘要

目的:肝硬化是多种慢性肝病发展的共同结果,也是一个世界性的治疗难题,晚期肝硬化出现肝功能减退,门脉高压和多种并发症,威胁着患者的生命,目前唯一有效的治疗方法就是肝脏移植,但由于供肝的缺乏和手术费及终身接受抗排斥药物治疗的费用,使得肝移植不能普遍开展。肝硬化的病理学基础是肝纤维化,而肝纤维化早期是具有可逆性的,因此,近年来的研究主要是针对抗肝纤维化的治疗。肝纤维化形成的实质是肝脏的创伤愈合反应。发生肝纤维化的机制可能是肝星状细胞（HSC）受肝脏的致病因子刺激激活,分泌大量的细胞外基质（ECM）,并引起基质金属蛋白酶（MMPs）和金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs）平衡失调及抑制HSC凋亡的发生。HSC的活化决定肝纤维化的形成、发展及转归,是肝纤维化的关键,而转化生长因子-β1（TGF-β1）是迄今所知道的在肝纤维化的启动、进展乃至肝硬化的形成中发挥核心作用的细胞因子。TGF-β1既能活化HSC,促使其分泌更多的TGF-β1,形成TGF-β1和HSC的恶性循环,又能促进基质合成并抑制其降解,同时抑制肝细胞再生,促其凋亡,它还通过对与肝纤维化有关的其他生长因子及调节基质代谢的酶类施加广泛影响,起到了致肝纤维化的作用。而TGF-β1抗体可中和HSC产生的过多的TGF-β1因子,拮抗TGF-β1的致肝纤维化作用。国内外已对TGF-β1在HSC、细胞因子网络、MMPs、TIMPs、纤溶酶中的作用等方面做了较为深入的研究,但由于其体系的复杂性,如何发挥TGF-β1的积极作用,抑制TGF-β1的促纤维化作用仍是今后科研工作中的一大重点。本研究旨在探讨TGF-β1抗体对活化的HSC中纤维性胶原、TIMPs的影响,以期进一步证实TGF-β1抗体在肝纤维化逆转中的作用,对研究肝纤维化的发生、发展及其临床治疗具有重要的意义。方法:本课题以大鼠肝星状细胞HSC-T6为研究对象,把培养的HSC-T6接种于6孔板上,分为6组,设正常空白对照组,TGF-β1 （1μg/ L）干预组,在TGF-β1 （1μg/ L）干预的基础上加入用培养基倍比稀释的不同滴度的TGF-β1抗体（1:100,1:200,1:400,1:800）,每组均培养6个孔,在24小时后收集细胞,提取总RNA,用逆转录定量多聚酶链反应（RT-PCR）方法分别测定各组的Ⅰ型胶原及TIMP-1的基因表达水平。结果:TGF-β1组Ⅰ型胶原的基因表达水平较正常空白对照组明显升高（正常组0.405±0.063,TGF-β1组0.740±0.048,P<0.01）,在TGF-β1抗体1:100组干预后,Ⅰ型胶原的基因表达水平较TGF-β1组下降（1:100组0.557±0.047,与TGF-β1比较P<0.01）,但仍高于正常空白对照组（P<0.01）, TGF-β1抗体1:200, 1:400, 1:800组干预后,Ⅰ型胶原的基因表达水平较正常空白对照组及TGF-β1组均无明显差别（P>0.05）; TGF-β1组TIMP-1的基因表达水平较正常空白对照组明显升高（正常组0.613±0.068,TGF-β1组0.925±0.051,P<0.01）,在TGF-β1抗体1:100组干预后,TIMP-1的基因表达水平较TGF-β1组下降（1:100组0.703±0.063,P<0.01）,但仍高于正常空白对照组（P<0.01）, TGF-β1抗体1:200,1:400,1:800组干预后,TIMP-1的基因表达水平较正常空白对照组及TGF-β1组均无明显差别（P> 0.05）。结论:TGF-β1使Ⅰ型胶原和TIMP-1的基因表达水平升高,促进了肝纤维化的发生,在TGF-β1因子干预的基础上,TGF-β1抗体滴度为1:100时可在一定程度上抑制Ⅰ型胶原和TIMP-1的基因表达水平。因此,TGF-β1抗体可能通过抑制Ⅰ型胶原及TIMP-1的基因表达,拮抗了TGF-β1的致肝纤维化作用,对肝纤维化的逆转起到了一定的治疗作用。

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• 1 与肝纤维化关系的研究进展'>综述 TGF-β₁与肝纤维化关系的研究进展
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