论文摘要
背景与研究目的:绝经期妇女由于卵巢功能衰退,雌激素水平下降而出现一系列生理、病理性变化,如绝经期综合证（CS）、脂代谢紊乱、高血压、骨质疏松、生殖器官萎缩等。中医认为,血由精气化生,在正常情况下有濡养机体的作用。绝经期前后,由于肾虚而引起其它脏腑功能失调,出现种种错杂证候,在治疗上以补肾为主。中医药对绝经期综合征及相关疾病的治疗有独特的优势,可有效缓解更年期出现的烦热、失眠、盗汗、心悸等症状。益妇宁软胶囊（YFN）是在多年的临床应用基础上,经处方筛选和论证及剂型选择制成的软胶囊剂。YFN以哈蟆油和莪术来补肾益精、调和气血,攻补兼治,标本同治。前期的临床及实验研究均已证实,YFN可以有效改善生殖内分泌系统的功能,提高体内雌二醇E2水平;同时还可以调节免疫系统,改善下丘脑—垂体—性腺轴的激素分泌失调,提高神经递质含量,稳定机体内环境,缓解更年期综合证的各种症状;调节去势大鼠血清性激素、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平,防治绝经后心血管疾病的发生。另外,YFN对绝经期骨质疏松症（PMO）也有较好的治疗作用。其机制不仅是通过增加体内雌激素水平,还可调节体内微量元素、增加骨组织内的雌激素受体含量,影响复杂的骨转换机制以达到治疗目的。软胶囊（Soft Gelatin Capsule）系指将一定量的药物、药材提取物加适宜的辅料密封于球形、椭圆形或其它形状的软质囊材中制成的剂型。该剂型外观光洁、美观,可掩盖药物不良气味,便于服用。对光敏感的药物、遇湿热不稳定的药物,如维生素、抗生素等,可装入不透光的胶囊中,保护药物不受湿气、空气中的氧以及光线的影响,从而提高其稳定性。软胶囊剂的可塑性强、弹性大,这取决于软胶囊囊材的组成,即明胶、增塑剂和水三者的比例。本制剂用药时间较长,日服用量小,可选择制成胶囊剂既兼顾药效又方便患者。处方中含有挥发性成分,故制成软胶囊剂,既可较好的保存有效成分,降低药材的用量,又可掩盖不良气味,改善口感。本课题旨在研究开发一种治疗此类疾病安全、有效、方便的药物,对其提取工艺、成型工艺进行深入研究。主要内容包括:1哈蟆油的鉴定;2不同粒径的哈蟆油定性比较;3益妇宁软胶囊提取工艺实验研究;4益妇宁软胶囊成型工艺实验研究。方法:1对哈蟆油进行性状、显微、膨胀度的鉴别、比较。利用感观方面的一些动作,如看、摸、闻、尝、水试等方法,根据完整药材或饮片的外观性状特征,如形状、大小、色泽、表面特征、质地、横断面特征及遇水膨胀现象和气味等进行鉴定。选择合适的有代表性的供试品,利用电子显微镜对样品进行制片（组织切片）、观察、摄影等,配合性状鉴别解决哈蟆油的鉴定问题。性状、膨胀度的鉴别比较可查阅中国药典2000版或2005版,显微鉴别则依赖相关文献报道。2对哈蟆油药材进行常规粉碎和超微粉碎,用显微鉴别法与薄层色谱法对其粒径、溶出成分进行比较。3运用水蒸气蒸馏法提取挥发油,提取挥发油后的水提液与之进行药效实验,比较莪术挥发油、提取挥发油后的莪术水提液的药效作用。采用正交试验法优选莪术油提取工艺条件和哈蟆油粉碎条件。莪术的提取工艺中,考察莪术粉碎度（饮片,＞8目颗粒,粗粉）,加水量（6倍,8倍,10倍）,蒸馏时间（3h,5h,7h）,确定最佳提取工艺。4根据软胶囊剂型特点,对内容物辅料进行筛选。结果:1哈蟆油样品呈不规则块状,弯曲而重叠,长1.5～2cm,厚1.5～5mm。表面黄白色,呈脂肪样光泽,偶有带灰白色薄膜状干皮。摸之有滑腻感,在温水中浸泡体积可膨胀。气腥,味微甘,嚼之有黏滑感。膨胀度检查为115。显微镜下观察呈金黄色,横切面呈卵圆形或阔卵圆形。小叶径向排列于管腔周围,呈长条形,腺体细胞呈梯状填充在小叶内;核明显,呈分枝状、星状或多角形,多偏向于结缔组织支架的一侧。输卵管内壁腺上皮细胞呈类卵形,数个为一组,切向排成一列。管腔呈三角形或四棱形,向角端延伸呈狭缝状或呈分枝状。哈蟆油与常见伪品中华大蟾蜍输卵管在显微鉴别上存在较大差异,最明显的差异是哈蟆油的细胞核大而明显,中华大蟾蜍输卵管的细胞核小而不明显。样品鉴定为哈蟆油。2薄层鉴别中,200目药材的斑点明显比80目和120目的颜色加深,超微粉的斑点较常规粉体的明显。3血瘀模型组大鼠与正常对照组大鼠比较,全血高、中、低切粘度,血浆粘度升高（P=0.000,0.001,0.006,0.000）,均有显著性差异,说明造模成功。莪术挥发油大剂量组可降低血瘀大鼠的全血高、中、低切粘度,血浆粘度（P=0.000,0.041,0.001,0.000）,均有显著性差异,小剂量只有降低趋势,而莪术提取挥发油后的水提物无论大小剂量组与模型组比较都无显著性意义,说明后者没有改善血瘀大鼠血液流变学的作用,即活血化瘀的作用。故从减少服用量的角度考虑,其水提部分不再列入总处方中使用。莪术油提取工艺条件考察结果表明,粉碎度对实验结果的影响具有统计学意义,加水量对实验结果差异无显著性意义,蒸馏时间对实验结果差异显著。由于加水量的影响小,考虑到直接蒸馏法加水量少时,中药易焦化,故加水量取8倍,确定最佳提取工艺条件为莪术粉碎成粗粉、加8倍量水、蒸馏7h。哈蟆油粉碎实验结果表明,粉碎温度越低,相同时间内粉碎的效果越好。细粉量在0～10min内随时间延长明显增加,10～20min内变化逐渐减小,20min以后几乎不再增加,故确定粉碎时间为20min。当粉碎温度为-20℃,粉碎时间达20min后,能通过九号筛的细粉量超过60%。为节省工时及能源,确定以过粗粉进行粉碎,粉碎温度为20℃,粉碎时间20min作为粉碎工艺较合理。4以橄榄油为稀释剂、蜂蜡为稳定剂时软胶囊成型良好,保证了软胶囊压制顺利进行和提高软胶囊的稳定性。结论1哈蟆油经超微粉碎后有助于化学成分的溶出,据此可简化药材提取过程。2提取工艺设计合理,对大生产有指导意义。3YFN的制备过程中,成型工艺很关键,实验中对赋形剂的选择与用量进行了考察,但还有待于今后的生产中进一步完善。4将该产品制成软胶囊,使之成为具有较高生物利用度,服用携带方便的制剂,从而克服原剂型的缺点,基本实现了“三效、三小、五方便”的目的。