论文摘要
目的:采用NF-κB p65 ASODN技术特异性阻断目的基因,探讨ASODN干扰前后胃癌细胞生长增殖及凋亡、细胞形态的变化,初步研究NF-κB p65下调对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响,探讨诱导凋亡可能的机制。方法:人工合成NF-κB p65 ASODN,通过脂质体转染法转染人胃癌细胞系SGC-7901,实验分为对照组、Lip组、ASODN+Lip组和MSODN+Lip组,核苷酸浓度为10μM、20μM、40μM。分别在药物转染后24h、48h、72h收集细胞,采用MTT法测定NF-κB p65 ASODN对胃癌细胞增殖及凋亡的影响;流式细胞仪检测胃癌细胞凋亡率及细胞周期;光镜观察药物作用后细胞形态学变化;通过免疫细胞化学技术检测NF-κB p65,Bcl-2蛋白的表达。结果:①MTT法检测显示:不同浓度的NF-κB p65 ASODN均可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,呈时间-剂量依赖性;②流式细胞仪检测显示:NF-κBp65 ASODN可诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G0/G1期,NF-κB p65 ASODN处理SGC7901细胞48 h后凋亡率为（50.51±3.35）%,错义寡核苷酸（MSODN）处理组为（20.34±2.11）%,两组相比,差异有显著性（P<0.05）。③HE染色显示:NF-κB p65 ASODN处理SGC-7901细胞48h后,光镜下可见细胞缩小变圆,核浓缩、核碎裂、边聚等。④免疫细胞化学结果显示:NF-κB p65 ASODN处理SGC-7901细胞48小时后, NF-κB p65蛋白及Bcl-2蛋白的表达水平较对照组显著下降（P<0.05）。结论:①NF-κB p65 ASODN与阳离子脂质体形成的复合物可以成功转染进入SGC-7901细胞内;②NF-κBp 65 ASODN在体外可以较明显的抑制SGC-7901细胞的增殖、诱导SGC-7901细胞凋亡,作用强度呈剂量-时间依赖性;③N F-κB p65 ASODN可以下调NF-κB p65,Bcl-2蛋白的表达;④NF-κB p65 ASODN诱导SGC-7901细胞凋亡的机制可能是其经脂质体转染入细胞后与细胞核及胞浆内NF-κB p65 mRNA特异性结合,抑制或封闭NF-κB p65 mRNA的表达,下调NF-κB p65蛋白及其下游产物Bcl-2等相关抑凋亡基因蛋白的表达,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。
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