临床分离大肠埃希菌的耐药性及分子生物学研究

论文摘要

目的：对临床分离大肠埃希菌进行体外抗生素的敏感实验和检测产超广谱β-内酰胺酶（Extended-spectrum β-lactamases ESBLs）株阳性率,了解本地区大肠埃希菌的耐药性和产ESBLs菌株分布及其表型,分析ESBLs P日性菌株与非产ESBLs菌株的耐药性差异；并检测试验菌株中qnr基因的分布,调查qnr阳性菌株中产ESBLs的情况,研究qnr基因克隆流行传播情况。方法：采用琼脂平皿稀释法对临床分离183株大肠埃希菌进行体外抗菌药物敏感性测定,双纸片确证实验检测ESBLs并分析其耐药表型,采用SPSS13.0软件进行统计分析产ESBLs株与非产ESBLs株的耐药差异性。用聚合酶链反应（PCR）方法扩增qnr基因,PCR产物纯化测序并在Genbank上比对测序结果,明确qnr基因类别；通过转移结合实验转染质粒,并测定受体菌及结合子的最低抑菌浓度（MIC）；及其产ESBLs情况；碱性裂解法提取质粒；应用ERIC-PCR及质粒酶切图谱分析qnr阳性株及质粒克隆流行传播情况。结果：大肠埃希菌对各种抗菌药物的耐药率分别为：β拉西林（84.0%）头孢呋辛（84.0%）,头孢唑啉（84.9%）,头孢噻肟（73.2%）,头孢他啶（44.3%）头孢吡哦（51.0%）环丙沙星（84.6%）,左氧沙星（80.7%）,加替沙星（77.4%）亚胺培南（0%）阿米卡星（28.5%）庆大（78.0%）氨曲南（51.1%）氯霉素（61.5%）；大肠埃希菌中产ESBLs菌株的发生率为67.2%,以CTX表型为主。产ESBLs菌株对多种抗菌药物的耐药率显著高于非产ESBLs菌株P（<0.05）。共检出7株菌株含有qnr基因,3株qnrA1,1株qnrB2,3株qnrSl,其中的5株检出产ESBLs,转移结合实验成功率为57.1%（4/7）,结合子对喹诺酮类药物的敏感性有所下降；ERIC-PCR以及质粒酶切产物电泳结果示没有一致条带。结论：本地区的大肠埃希菌对多种抗菌药物呈高耐药性,与非产ESBLs菌株相比产ESBLs菌株的高耐药率及多重耐药性更为明显,临床应加强对大肠埃希菌的耐药性检测,准确诊断感染,合理使用抗生素,并防治耐药菌株的传播流行。我院大肠埃希菌qnr基因的检出率较之前研究有上升趋势,qnr基因阳性株中ESBLs的百分比较高,并且ESBLs基因能同qnr基因同时传播,两者常有协同作用能显著提高对喹诺酮的耐药性,同时使得qnr基因阳性菌株有严重的多重耐药性。我院检测出的qnr基因阳性株无同源性。

论文目录

• 缩略词表
• 摘要
• Abstract
• 第一部分 临床分离大肠埃希菌耐药性分析
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 大肠埃希菌基因的检测
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述
• 参考文献