论文摘要
目的探讨PLA2/LPC途径在FFAs致肝细胞脂性凋亡中的作用及分子机制。方法常规培养张氏肝细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察饱和脂肪酸（棕榈酸,PA）和PLA2抑制剂作用18小时后细胞的增殖情况,用Hoechst33258染色和AnnexinV-PI染色流式细胞术检测细胞凋亡；尼罗红染色检测细胞内脂质含量；分别运用荧光定量PCR及Western-blot方法在mRNA水平及蛋白水平检测三种PLA2亚型（sPLA2、cPLA2、iPLA2）的表达,用生化反应酶法检测细胞中裂解液中LPC水平。结果PA干预后的肝细胞细胞增殖抑制率随PA作用时间延长、浓度增加而进行性增加,细胞凋亡明显增加（P<0.05）；尼罗红染色显示PA并未引起细胞内大量脂肪蓄积；PA诱导过程中,三种PLA2亚型表达明显增加；且PA干预后肝细胞内LPC含量增加。iPLA2特异性抑制剂（BEL）,cPLA2特异性抑制剂（AACOCF3）和sPLA2抑制剂（sPLA2-IIA InhibitorⅠ）分别与PA共孵育18小时后,细胞活性,细胞凋亡率较PA单独孵育明显改善。BEL、sPLA2-IIA InhibitorⅠ可使PA诱导的细胞内LPC含量下降,而cPLA2特异性抑制剂AACOCF3对LPC含量无明显影响。结论PLA2/LPC途径在游离脂肪酸致肝细胞脂性凋亡过程中起重要作用,其中PLA2是这一途径的关键调控分子。