NF-κB“圈套”对癫痫大鼠脑内COX-2调控作用的研究

论文摘要

癫痫（Epilepsy）给患者带来的巨大伤害是由癫痫反复发作（Seizure）所引起的脑损伤,而癫痫的脑损伤的主要原因是由癫痫发作所引起的脑内炎症反应。关于癫痫的脑内炎症反应机制,近年来的研究报道显示,癫痫的炎症反应与脑内环氧化酶-2（Cyclooxygenase-2,COX-2）的表达增加及前列腺素（PGs）水平增高有着密切关系,COX-2为PGs合成的限速酶,被激活后不仅可产生氧化应激反应,还可将花生四烯酸转化为PGs等有害物质,虽然COX-2可被促炎性因子和某些与炎症反应有关的生长因子所诱导,但在中枢神经系统及癫痫动物脑内COX-2的激活调节机制还并不十分清楚。核转录因子（NF-κB）的激活可高效诱导靶基因的转录,调节着诸多参与免疫、炎症反应因子如细胞粘附分子、细胞因子等的表达,在炎症和免疫反应中起着调控作用,已有研究证明在癫痫的脑损伤中NF-κB起着重要作用。但是在癫痫发作过程中是否由于NF-κB的激活,从而调控了其下游靶基因之一COX-2的高表达,才导致了脑内的炎症反应和一系列病理变化尚无明确报道。目的:本研究设计并合成与核转录因子NF-κB顺式元件相一致的双链寡聚脱氧核苷酸（κB-decoy）和相应的无关序列（错配-decoy）,用这种核转录因子“圈套”策略抑制NF-κB的活性,通过研究癫痫大鼠脑内NF-κB的活性被抑制时COX-2的表达情况,明确癫痫的脑损伤病理变化与NF-κB活性和COX-2表达的相关性以及NF-κB在癫痫中对COX-2表达的调控作用,以进一步了解癫痫的脑内病理改变机制。方法:选用体重为250-300g的健康成年SD雄性大鼠,将其随机分为3组即（1）实验组（注射κB-decoy组）、（2）对照组（注射错配-decoy组）、（3）正常组（注射生理盐水组）。κB-decoy-ExGen500复合物和错配-decoy-ExGen500复合物由大鼠脑立体定位仪于脑室内微量注射,采用氯化锂-匹罗卡品（40mg/kg）制备大鼠癫痫模型,癫痫发作后选取不同的时间点的大鼠灌流固定,免疫组化方法测定NF-κB和COX-2在脑内癫痫敏感脑区的活性,RT-PCR测定COX-2的表达。结果: NF-κBp65免疫组化结果显示:与对照组相比,实验组大鼠海马结构CA1区、CA3区和齿状回门区神经元胞浆中免疫阳性染色明显增强; NF-κB未发生核转移,其活性被抑制。COX-2免疫组化结果显示:与对照组相比,实验组大鼠海马神经元的免疫阳性染色明显减弱; COX-2的表达水平低于对照组。RT-PCR结果显示:与对照组相比,在癫痫发作后4h时实验组的大鼠海马结构COX-2mRNA表达水平明显降低。结论:1. NF-κB“圈套”具有抑制癫痫大鼠脑内NF-κB活性的作用。2. NF-κB“圈套”具有抑制癫痫大鼠脑内COX-2表达的作用。3.在癫痫大鼠脑内,NF-κB对其下游靶基因COX-2具有调控作用,即NF-κB被激活后使COX-2的转录和表达增加,NF-κB被抑制后使COX-2的转录和表达减少。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料和方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• （九） 附图
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢