禽流感病毒（Avian Influenza Virus,AIV）是引起禽类全身性或呼吸器官性传染病的病原,禽流感（AI）是目前影响世界养禽业的最严重疫病之一,不仅给养禽业造成了巨大的危害,而且也能感染人并致死亡,给人类的健康带来了严重的威胁。针对禽流感流行的这种严峻状况,迫切需要建立一种快速诊断高致病性禽流感和人流感的方法,研制一种能预防高致病性禽流感和人流感的亚单位疫苗,从而有效地预防和控制禽流感,保障人们的身体健康,促进畜牧业的快速发展。在其主要组成蛋白中,血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）是其最主要的保护性抗原,能诱导机体产生中和抗体抵抗感染和疾病发生,因此对AIV的诊断、防治的研究多集中于对HA、NA蛋白的研究。参考Genbank上发表的H5亚性禽流感病毒（A/chicken/Henan/01/2004（H5N1））基因序列,利用PCR方法从质粒T-HA、T-NA上扩增HA、NA基因,将HA、NA基因和表达载体pET-28a（+）,pET-32a（+）同时用HindIII和XhoI酶切后,构建成重组表达质粒pET28a-HA,pET32a-NA转化宿主菌BL21（DE3）,经酶切及PCR扩增鉴定筛选出阳性克隆。测序证明,目的基因正确插入到表达载体,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达,收集不同时间的菌液进行SDS-PAGE,结果表明AIV HA、NA基因在大肠杆菌中能高效表达,表达的目的蛋白的分子量约为60kD,位于包涵体中。包涵体经变性、复性处理,表达蛋白能与H5亚型AIV阳性血清特异性反应,具有良好的抗原性。ELISA检测结果表明,用此两种纯化蛋白作为包被抗原检测H5N1亚型AIV血凝素和神经氨酸酶抗体具有良好的灵敏性。
本文来源: https://www.lw50.cn/article/03b76fb9cbef9d2ab8a26659.html