目的 制备 DHAQ-GM-CSF 免疫脂质体并观察其对白血病 HL60 细胞系的作用,为探索临床治疗急性髓性白血病的新方法提供实验依据。方法 用逆向蒸发法制备 DHAQ 脂质体,高速离心法分离 DHAQ 脂质体和游离 DHAQ 溶液,比色法测定包封率,透射电镜下观察脂质体的结构和粒径分布,再以戊二醛交联法偶联 GM-CSF 和 DHAQ 脂质体制备免疫脂质体,蔗糖密度梯度离心法分离免疫脂质体和游离 GM-CSF,紫外分光光度法测定偶联率,流式细胞术测定偶联后 GM-CSF 的活性保留率。制备好的 DHAQ-GM-CSF 免疫脂质体通过 MTT 法测定其对白血病 HL60 细胞系的杀伤作用,同时验证 DHAQ-GM-CSF 免疫脂质体中 GM-CSF 的导向作用。透射电镜观察细胞的形态学变化,Annexin-Ⅴ/PI 双染后用流式细胞术测定凋亡细胞,研究 DHAQ-GM-CS 作用后 HL60 细胞的存活率、凋亡率和凋亡形态学上的变化。结果 1、DHAQ 脂质体的包封率:81%;多为单层脂质体,粒径:170-220nm;DHAQ-GM-CSF 免疫脂质体的偶联率:41.7%;活性保留率:75.1%。2、DHAQ-GM-CSF 免疫脂质体、DHAQ脂质体、DHAQ 对 HL60 细胞均具有细胞毒作用,其中 DHAQ-GM-CSF 免疫脂质体和 DHAQ 脂质体的细胞毒作用均显著强于 DHAQ(p<0.05﹚,而DHAQ-GM-CSF 免疫脂质体的细胞毒作用显著强于 DHAQ 脂质体(p<0.05﹚。DHAQ-GM-CSF 免疫脂质体、DHAQ 脂质体和 DHAQ 作用 24h 的 IC50分别为 3.04μg/ml、9.33μg/ml、18.15μg/ml;作用 48h 的 IC50 分别是:0.87μg/ml、3.02μg/ml、6.69μg/ml,在两个时间点DHAQ-GM-CSF 免疫脂质体的杀伤作用都随药物剂量的增加而增强。3、
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