猪流感病毒在全世界猪群中广泛存在,是养猪场普遍存在且难以根除的猪呼吸道病之一,不仅给养猪业带来了巨大的经济损失,而且在公共卫生方面也有着十分重要的意义。本研究分离到4株猪流感病毒,并对其生物学特性及HA基因变异分析进行了研究,为SIV的疫情监测及防控提供依据。本研究分离到4株猪流感病毒,分别命名为A/Swine/Henan/01/2008、A/Swine/Henan/02/2008、A/Swine/Henan/03/2008、A/Swine/Henan/04/2008,送哈尔滨兽医研究所进行血清亚型鉴定,鉴定结果均为H3N2亚型。RT-PCR法扩增NP基因,用DNStar软件分析,做系统进化树,NP基因全长为1565bp,编码520个氨基酸,分离株间基因序列同源性在99.3%-99.8%之间,均与猪流感H3N2亚型香港分离株的同源性在99.2%-99.7%之间,与其他NP基因的同源性在80.0%-89.9%之间,与欧亚种系中亚洲分离株亲源性较近。本研究对病毒的血凝素稳定性、凝集谱、感染力的热稳定性、耐酸性、细胞易感性、交叉保护中和试验以及对小白鼠、鸡和仔猪攻毒试验等病毒生物学特性进行了研究,采用鸡胚分离法和PR-PCR法,通过尿囊腔和羊膜腔接种病料,特异性较强,分离率高。分离株血凝性对热不稳定,反复冻融时,病毒的HA效价降低的比较快;能凝集鸡和兔的红细胞;对热敏感,56℃30min就失去感染力;对酸、氯仿和乙醚敏感;病毒经胰酶处理后,可使其中的一株猪流感病毒感染Vero细胞,血凝效价较低;病毒的半数致死量在10-0.4-10-0.51之间;感染的SPF鸡胚全身性出血;感染小白鼠、鸡和猪,出现精神不振等临床症状,同居鼠不感染;在感染后第5d和10d检测到攻毒小鼠肺内病毒的存在,第7d、第14d、21d、28d均能检测到HI抗体效价。用RT-PCR法克隆A/Swine/Henan/01/2008的HA基因,用DNStar软件对其序列与GenBank中收录的其他猪流感、禽流感和人流感的相关基因进行分析比较并做系统进化树,结果表明所扩增的HA基因全长为1753bp,编码583个氨基酸,有9个糖基化位点,第326位的精氨酸为裂解位点,裂解位点（即PSHQR↓G）附近的氨基酸非常保守,没有碱性氨基酸存在,不具备高致病性猪流感的特征。HA1上有7个潜在糖基化位点,HA2上有2个潜在糖基化位点。该分离株与猪流感H3N2亚型香港分离株基因序列同源性在96.3%-98.3%之间,表明该毒株与欧亚种系中亚洲分离株亲源性较近。
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