目的:利用已经构建好的腺相关病毒-人组织激肽释放酶基因重组体 （rAAV-HTK）,感染人工培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,观察HUVEC 细胞合成组织激肽释放酶蛋白量的变化,以及rAAV-HTK 转染对内皮细 胞功能的影响,探讨利用rAAV-HTK 治疗高血压、缺血性心脏病的可行 性。方法:1.将已经构建好的rAAV-HTK 重组质粒感染人工培养的HUVEC 细胞。2. 应用ELISA 方法测定HUVEC 细胞上清液和细胞内人组织激肽释放酶 （HTK）的含量。3.应用半定量RT-PCR 方法检测感染rAAV-HTK 前后 HUVEC 中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、凋亡蛋白酶（caspase-3）、 内皮素-1（ET-1）、血管内皮生长因子（VEGF）、内皮素B1受体（ETR-B1） 以及缓激肽B1受体、缓激肽B2受体的mRNA 表达量变化情况。结果:1.转染有rAAV-HTK 的HUVEC 细胞内HTK 含量比对照组增高3 倍。2.在 人工培养的HUVEC 细胞上清液中没有检测到HTK。3.转染有rAAV-HTK 的HUVEC 细胞与对照组相比,其细胞内eNOS 的mRNA 合成量增加, caspase-3 的mRNA 表达量降低,VEGF、ET-1、ETR-B1、缓激肽B1受体、 缓激肽B2受体的mRNA 表达量没有变化。结论:rAAV-HTK 重组体感染HUVEC 细胞可以使HUVEC 细胞合成HTK 增多,eNOS 的mRNA 表达量增高,NO 产生增加,caspase-3 的mRNA 表达量减低。 这些作用提示HTK 能够改善内皮细胞功能,在实践上为高血压等血管 内皮功能异常的心血管疾病的基因治疗奠定了基础。
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