人心脏和内皮细胞中mir126的克隆和功能的初步研究
论文摘要
目的:克隆并发现人心血管高表达miRNA,分析其表达谱并寻找其靶基因,探寻其可能参与的心血管生理病理过程。方法:构建人心脏和内皮细胞的miRNA文库,运用Northern Blot和实时荧光定量PCR检测miRNA的表达谱。通过生物信息学以及分子生物学手段预测、分析新发现miRNA的来源和作用的靶基因。运用基因芯片检测过表达新发现miRNA的Hela细胞并高通量分析该miRNA可能调控的基因。结果:克隆到数百个心血管表达的miRNA,首次在人的组织和细胞中克隆到mir-126并证实其高表达于内皮和心肌细胞。发现mir-126来源于egfl7基因的第7个内含子中并能通过宿主mRNA前体的剪切形成。发现VEGF是mir-126的靶基因,并且mir-126在乳腺癌组织中表达下调。此外,mir-126能够下调AKT2基因同时能够激活TNFAIP3和CXCL11的表达。结论:Mir-126是一个心血管系统高表达miRNA并且在调节心肌代谢和血管新生等过程中起重要作用。
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中文摘要英文摘要英文缩略词详细摘要前言第一部分 人心脏和内皮细胞microRNA 文库的构建和表达谱分析实验材料实验方法实验结果1. 人心脏和内皮细胞microRNA 文库的构建2. Northern Blot 检测miRNA 方法的建立及表达谱分析3. 实时荧光定量 PCR 检测miRNA 方法的建立讨论第二部分 Mir-126 的来源、物种保守性及其形成机制的初步研究实验材料实验方法实验结果1. 不同物种基因组中mir-126 前体和成熟序列的保守性分析2. Mir-126 前体二级结构的预测3. Mir-126 前体在哺乳动物基因组中的定位4. hEgf17（126）-pEGFPc1 重组质粒表达产物的分析5. Mir-126 宿主基因 Egf17 的表达谱检测讨论第三部分 Mir-126 靶基因的寻找和功能的初步研究实验材料实验方法实验结果1.Mir-126 靶基因的生物信息学预测2.VEGF 是mir-126 的靶基因3.Mir-126 在乳腺癌组织中表达下调4. 运用芯片和定量 PCR 技术检测分析mir-126 调控的基因讨论结论参考文献综述 MicroRNA 在心血管发育和疾病中的功能研究进展致谢
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