目的:探讨miR-122沉默Bcl-2和Bcl-XL对BEL-7402/5-FU细胞5-氟尿嘧啶敏感性影响及其作用机制。方法:基因芯片检测BEL-7402和BEL-7402/5-FU细胞中表达差异显著的miRNA,采用靶基因预测软件分析出与Bcl-2基因家族相互作用的miRNA,通过以上两种方法结果的比对,筛选出miR-122为目的miRNA,在pSilencer3.1-H1载体的BamHⅠ和HindⅢ酶切位点中插入miR-122序列,将含有miR-122序列的质粒载体和空载体分别转染至BEL-7402/5-FU细胞中,采用MTT法,流式细胞仪,实时荧光定量RT-PCR和Western-Blot分别检测未转染组、空载体转染组和miR-122转染组的细胞活性,细胞凋亡情况,miR-122、Bcl-2、Bcl-XL和P53 mRNA表达情况,以及Bcl-2、Bcl-XL和P53蛋白表达变化情况。结果:分别用0.1、1、10、100μmol/ml 5-氟尿嘧啶处理肝癌细胞BEL-7402/5-FU 24小时后,MTT显示miR-122转染组细胞生长抑制率较未转染组和空载体转染组明显增高（23.40±1.83%vs.8.85±1.50%、8.41±1.56%;24.00±1.67%vs.10.43±1.82%、9.29±2.94%;40.5±5.91%vs.12.01±1.10%、12.61±3.43%;65.54±6.10%vs.42.65±2.49%、41.13±1.91%;P<0.05）。5-FU药物的IC50值:miR-122转染组较未转染组和空载体转染组有显著降低（21±1.4μmol/ml vs.206±14.8μmol/ml、223±14.4μmol/ml,P<0.05）。流式细胞仪检测,miR-122转染组凋亡率较未转染组和空载体转染组有所增加,其凋亡率分别为:5.6±0.35%vs.1.0±0.52%、2.2±0.48%;用1和10μmol/ml5-氟尿嘧啶处理细胞24小时后,miR-122转染组凋亡率与未转染组和空载体转染组比较有显著性升高,并随药物浓度增加,miR-122转染组凋亡率较空载体转染组和未转染组差异性显著性增加;（25±1.22%vs.7.6±0.86%、9.2±0.78%;42±2.0%vs.9.22±0.9%、11.9±1.0%;P＜0.05）实时荧光定量RT-PCR检测miR-122转染组与未转染组、空载体组比较:Bcl-XL mRNA表达水平降低,P53 mRNA表达水平升高;Western blot检测转染miR-122转染组与未转染组、空载体转染组比较:Bcl-2、Bcl-XL蛋白表达水平降低,P53蛋白表达水平升高。结论:miR-122增加BEL-7402/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性,促进Bel-7402/5-FU细胞凋亡。miR-122能特异性下调BEL-7402/5-FU细胞Bcl-2、Bcl-XL的表达、提高P53蛋白表达水平。
本文来源: https://www.lw50.cn/article/1758b8136771260d1da2948a.html