猪链球菌（Streptococcus suis S.suis）是一种重要的人畜共患病原体，可引起猪脑膜炎、心内膜炎、关节炎及败血症等疾病，亦可引起人类感染，导致脑膜炎及中毒性休克综合征等严重疾患。该菌有33个血清型，其中以2型流行最广、致病性最强。猪链球菌有多种毒力因子，如溶菌酶释放蛋白（MRP），溶血素（SYL），胞外蛋白因子（EF）等，但MRP是该菌最为重要的毒力因子之一。本研究根据猪2型链球菌溶菌酶释放蛋白编码基因序列，设计并合成1对特异性引物，以猪2型链球菌青海株基因组为模板扩增MRP基因34-813bp片断，并进行T/A克隆，转化大肠杆菌，成功获得目的片断，将目的片段定向克隆到pET-28a（+）组氨酸的下游。用鉴定阳性的重组质粒转化BL21，经IPTG诱导可表达分子量约27kD的融合蛋白。免疫印迹分析表明，该融合蛋白具有MRP的抗原表位。本研究克隆了猪2型链球菌青海株MRP基因完整的阅读框。编码区长度为3771bp，与已登陆的序列对比发现此基因的阅读框高度保守。将克隆的青海株的MRP基因插入pAdTrack-CMV穿梭质粒，获得了转移质粒pAdTrack-CMV/MRP，对之线性化后，用pAdEasyTM系统，电转化已含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的感受态大肠杆菌，经同源重组，获得含有全MRP基因的腺病毒载体pAd/MRP，后者经酶切充分暴露反向末端重复序列后，与脂质体混合转染HEK-293细胞，获得了复制缺陷型重组腺病毒rAd-MRP。RT-PCR检测到重组腺病毒rAd-MRP中MRP基因在转录水平有表达。连续传代和PCR检测表明rAd-MRP在HEK-293细胞中传代稳定。为评价重组腺病毒rAd-MRP的免疫效果，用其免疫28日龄小鼠后，间接ELISA可以检测到特异性抗体，抗体滴度达1：160。
本文来源: https://www.lw50.cn/article/19a4a93eafde1ccee8025c00.html