本实验旨在研究天麻蛋白（GRP）在肿瘤细胞、正常细胞中的作用,并进一步探讨诱导肿瘤细胞凋亡、促进造血细胞增殖的分子机理。实验用磁性纳米粒子吸附法纯化水提物中的蛋白成分,通过活细胞计数法确定以连有纳米粒子的GRP为实验药物。MTT法得到药物对细胞的最佳作用浓度,应用荧光显微镜、流式细胞仪DNA凝胶电泳仪检测GRP对肿瘤细胞的生长抑制,通过观察DNA Ladder的发生来观察细胞凋亡,并用RT-PCR检测到与凋亡有关的基因p53的表达。发现GRP对小鼠MNC扩增有作用,从而将GRP运用到人脐带血MNC的扩增分化上,用集落形成法分析药物与扩增的线性关系,基质层、基质上清对CFU-GM的影响,用RT-PCR技术检测基质层细胞生长因子基因的扩增。结果发现,1、磁性纳米粒子分离到GRP蛋白较未纯化药物有更好的凋亡诱导作用,且磁性纳米粒子本身并不具细胞毒害作用;2、GRP抑制肿瘤细胞生长,随药物剂量加大,细胞凋亡数上升,其半数抑制浓度为571.5μg/ml,凋亡特征明显,其原因可能是药物诱导p53基因扩增;3、低浓度（≤600μg/ml）GRP促进造血细胞分化,高浓度（>600μg/ml）反而抑制,在400μg/ml药物诱导下,基质细胞生长因子基因强表达,可能是促进MNC中粒系分化的主要因素。总之,GRP通过诱导肿瘤细胞凋亡达到抑癌目的,同时又对正常细胞生长有正调控,有望得到新的有效的抗癌药物。
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