MY与NC相互作用的功能

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Nc蛋白在细胞黏附和迁移中执行着重要的功能。在最近细胞黏附复合体的研究中发现,Nc蛋白通过改变自身的构象,选择性的与细胞的F-Actin或者Bnc/膜结合,从而作为一个“分子开关”参与细胞的生理活动；或者,受myocin张力的影响,Nc蛋白选择性的与Actin结合,将F-Actin连接到细胞膜上,成为“张力传导体”。Nc蛋白结构的变化,使得Nc蛋白可以选择性地与不同分子结合,产生不同的细胞效应。我们的研究发现,My蛋白是一个Ncl特异的相互作用蛋白。当My蛋白存在时,Nc1可以和Bnc,Actin在细胞中形成一个复合体。而这与“分子开关”模型似乎相矛盾。通过RNAi技术,去除细胞中My蛋白的表达,免疫沉淀实验表明Bnc与Actin的结合明显减少。由此我们推断,My蛋白是“分子开关”的一个调节蛋白。在SH-SY5Y人神经母细胞瘤中,去除My蛋白,细胞中的F-Actin在细胞膜“集束”,细胞变形,细胞的迁移能力和黏附力受到影响,而浸润和迁移是恶性肿瘤的重要特征,因此,关于细胞粘附和迁移的蛋白分子机制的研究对于探究肿瘤细胞发生发展机制有重要意义。

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第1章绪论

1.1 研究背景

1.2 国内外研究现状

1.3 课题来源及主要研究内容

第2章实验材料和方法

2.1 实验材料

2.1.1 基因序列

2.1.2 实验动物

2.1.3 实验菌株及质粒

2.1.4 实验试剂

2.1.5 仪器设备

2.2 实验方法

2.2.1 RNA的提取

2.2.2 RT-PCR

2.2.3 载体构建

2.2.4 大肠杆菌感受态制备及转化

2.2.5 鉴定

2.2.6 蛋白表达纯化

2.2.7 Pull-Down

2.2.8 Western-Blot

2.2.9 细胞操作

2.2.10 细胞转染

2.2.11 细胞免疫荧光

2.2.12 免疫沉淀

第3章实验结果

3.1 My是Nc1的相互作用蛋白

3.2 My1,Nc1,Actin和Bnc在体内形成复合体

3.3 My1是Nc1的调节蛋白

3.4 My1与Nc1相互作用的影响

3.4.1 亚细胞定位

3.4.2 My1RNAi使细胞形态功能发生改变

3.4.3 My1与Nc1相互作用的功能

结论

附录

参考文献

致谢

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