BTBD-10基因在人脑胶质瘤细胞中功能的初步研究

论文摘要

目的：初步了解人胶质瘤相关基因BTBD10在胶质瘤细胞周期与细胞凋亡过程中的作用。方法：1、构建pcDNA4c-BTBD10基因表达载体。2、pcDNA4c-BTBD10载体转染U-251胶质瘤细胞株，MTT法绘制生长曲线，流式细胞仪检测转染后细胞增殖及分化情况。3、构建pEGFP N1-BTBD10绿荧光载体，转染U251、AD293细胞株，了解BTBD10基因的亚细胞定位。DAPI染色了解细胞核形态。4、免疫组化方法检测转染后细胞BAX／BCL-2、Ki67蛋白表达情况。结果：1、成功构建pcDNA4c-BTBD10基因表达载体。2、pcDNA4c-BTBD10载体成功转染U-251胶质瘤细胞株，MTT法绘制生长曲线，流式细胞仪检测转染后细胞发现细胞出现凋亡，被转染细胞阻滞在S期。3、成功构建pEGFP N1-BTBD10绿荧光载体，发现BTBD10基因定位于细胞核，转染后U251细胞株出现凋亡。4、免疫组化方法检测转染后细胞发现：Bax抗原表达上升，Bcl2抗原表达下降，Ki67抗原表达下降。结论：人胶质瘤相关基因BTBD10具有阻止胶质瘤细胞增殖和诱导胶质瘤细胞株凋亡的功能。

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前言

第一部分 pcDNMC-BTBD10载体构建

一、材料和方法

（一）材料

（二）方法

二、结果

（一）引物

（二）质粒双酶切

（三）测序

三、讨论

（一）方法

（二）有关BTBD10基因

四、结论

第二部分 BTBD10-pCDNA4C质粒转染胶质瘤U-251细胞株,检测其对增殖、分化的影响。

一、材料和方法

（一）材料

（二）方法

二、结果

（一）细胞凋亡

（二）细胞周期

（三） MTT法

（四）生长曲线

三、讨论

（一）方法

（二）结果讨论

四、结论

第三部分 pEGFPN1-BTBD10表达载体的构建和转染,BTBD10基因亚细胞定位和转染后细胞Bax／Bcl2、Ki67等抗原的检测。

一、材料和方法

（一）材料

（二）方法

二、结果

（一）引物

（二）质粒双酶切

（三）质粒测序

（四）绿荧光发光,DAPI染色

（五）免疫组化结果

三、讨论

（一）绿荧光载体与亚细胞定位

（二） DAPI染色与细胞凋亡

（三） His-Tag

（四） Bax／Bcl2

（五） Ki67

四、结论

总结及展望

综述

致谢

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